超微量高纯度质粒快速提取试剂盒（质粒小提）

货号	次数
NP03012	100次
NP03013	200次

适用范围

适用于小量或微量质粒的快速提取。

试剂盒组成、储存、稳定性

试剂盒组成	保存	100 次（NP03012）	200 次（NP03013）
平衡液	室温	10 mL	20 mL
RNaseA（10mg/mL）	-20℃	250µL	500µL
溶液 P1	4℃	25 mL	50 mL
溶液 P2	室温	25 mL	50 mL
溶液 P3	室温	35 mL	70 mL
漂洗液 WB	室温	25 mL 第一次使用前加 100mL 无水乙醇	25 mL×2 第一次使用前加 100mL 无水乙醇 ×2
去蛋白液 PE	室温	31.5 mL 第一次使用前加 18mL 无水乙醇	63 mL 第一次使用前加 36mL 无水乙醇
洗脱缓冲液 EB	室温	15mL	15mL
吸附柱 NE/ 收集管（2mL）	室温	100 个	200 个

存储事项

本试剂盒在室温储存 24 个月不影响使用效果。

第一次使用时，将试剂盒所带的全部 RNaseA 加入溶液 P1 后（终浓度 100μg/mL）置于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残留，在溶液P1 中补加 RNase A 即可。

环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可能会析出浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍

本试剂盒采用改进 SDS- 碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低 pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点

离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如 JM 系列、 HB101 也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。

快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项

所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机。

提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议接种单菌落于1.5-4.5 mL 加合适抗生素的 LB 培养基，过夜培养 14-16 个小时，可提取出多达 20µg 的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用 5-10 mL 过夜培养物，同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步骤相同。

得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为 1 相当于 50µg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为 2 条或者多条 DNA 条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过 90%。

质粒 DNA 确切分子大小，必须酶切线性化后，对比 DNA 分子量 Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。

洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该－ 20℃保存。质粒 DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

关于平衡液的使用

介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷 / 尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力，从而提高硅胶柱子回收效率。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。平衡液室温保存，在保存过程中如有沉淀生成，请加热至 37℃使沉淀完全消失。

使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取 100µL 的平衡液至柱子中。13,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。