超微量琼脂糖凝胶纯化回收DNA试剂盒（胶回收）
| 货号 | 次数 |
| NP01012 | 100次 |
| NP01013 | 200次 |
适用范围
适用于琼脂糖凝胶 DNA 回收和 PCR 产物清洁回收。
试剂盒组成、储存、稳定性
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试剂盒组成 |
保存 |
100 次（NP01012） |
200 次（NP01013） |
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平衡液 |
室温 |
10 mL |
20 mL |
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溶胶液 DD |
室温 |
50mL |
100mL |
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漂洗液 WB |
室温 |
25 mL 第一次使用前加入 100mL 无水乙醇 |
25 mL×2 第一次使用前加入 100mL 无水乙醇 ×2 |
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洗脱缓冲液 EB |
室温 |
15 mL |
15 mL |
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吸附柱 NS/ 收集管（2 mL） |
室温 |
100 个 |
200 个 |
本试剂盒在室温储存 24 个月不影响使用效果。
储存事项
所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可 在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
储存于低温（4℃或者 -20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温 下（15℃ -25℃)进行。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍
在高离序盐存在的情况下，DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系 列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点
·离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。 ·溶胶液不含碘化钠和高氯酸盐，不影响回收后酶切、连接克隆等下游反应。
·溶胶液加酚红调制成为了黄颜色， 便于观察溶胶效果和监测 pH 值变化从而达到最佳结合效果， 大大提高回收效率。
·改进的溶胶液配方 , 大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将 pH 缓冲在最佳 结合范围内。
·快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
注意事项
《 所有的离心步骤均在室温完成，建议使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机。
《 溶胶液中含有刺激性化合物， 操作时要戴乳胶手套， 避免沾染皮肤， 眼睛和衣服。若沾染皮肤、 眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
《 回收纯化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之间， 过长、过短片段的回收效率有所降低。
《 回收 DNA 的量和起始 DNA 的量、洗脱体积、DNA 片断大小有关。 一般 1-15μg， 100bp-5kb 的 DNA 片段，回收率可高达 85％。
《 切胶回收时，紫外灯观察对 DNA 片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线， 并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
《 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应 该确保 pH 大于 7.5，pH 过低会影响洗脱效率。用水洗脱，DNA 片段应该保存在 -20℃。 DNA 片段如果需要长期保存， 可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
关于平衡液使用
介绍： 核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷 / 尘埃发生反应而影响其核酸的结 合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力，从而提高硅胶柱子回收效率。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完 后需盖紧瓶盖，以免接触空气。平衡液室温保存，在保存过程中如有沉淀生成，请加热至 37℃使 沉淀完全消失。
使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取 100μL 的平衡液至柱子中。13,000 rpm 离心 1 分钟， 倒掉收集管中废液， 将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。 接后续的操作步骤。
产品特点
提示： 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加 入乙醇，以免多次加入 !
1. 平衡液预处理吸附柱： 吸取 100μL 的平衡液至柱子中。13,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集 管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。
2. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA 的凝胶，得 到凝胶体积越小越好。
3. 将切下的含有 DNA 条带凝胶放入 1.5mL 离心管，无需称重，加 400μL 溶胶液 DD。（PCR 产物回收：当 PCR 反应液或酶切反应液体积不足 100μL 时，用水或 TE 缓冲液 洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0）补充至 100μL，加入 300μL 溶胶液 DD 充 分混匀，直接进入步骤 5）
4. 56℃水浴放置 10 分钟（或直至胶完全溶解）。每 2-3 分钟震荡一次加速溶解。
5. 将上一步所得溶液加入吸附柱 NS 中（吸附柱放入收集管中） ，室温放置 1 分钟， 12,000rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至 紫色，此为酚红 pH 指示剂碱性条件下的正常颜色变化。
6. 加入 600μL 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇 !），12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
7. 加入 600μL 漂洗液 WB，12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
8. 将吸附柱 NS 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残 留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱 NS， 放入一个干净的离心管中， 在吸附膜的中间部位加 50μL 洗脱缓冲液 EB（洗 脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置 2 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟。 如果需要较多量 DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心 1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最 小体积不应少于 25μL，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少产量。
说明书：
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