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5x 高效 PCR MIX

5x 高效 PCR MIX
货号 次数
NL01021 1mL/管

 

适用范围

基因检测、定点突变分析和 T-A 克隆。

 

试剂盒组成、储存、稳定性

 

试剂盒组成

保存

规格

5XEffcient Taq PCR  Master Mix (with Dye)

-20℃

1mL/ 管

 

储存事项

长期储存置于 -20℃ 以下,可保存 3 年;短期使用置于 4℃(12 个月)保存。

产品介绍

本品是用于普通 PCR 扩增的 5x 预混体系,含有高纯度的 Taq DNA 聚合酶、dNTPsMgCl2   反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为  1×, 即可进   行反应, 大大简化了操作过程、提高了效率、整个反应体系非常稳定、减少了 PCR 操作过程中的人为   误差、节约操作时间、降低污染几率, 具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。 Taq DNA Polymerase 其基因来源于 Thermusaquaticus polymerase,  具有扩增效率高、错配率   低的优良性能,由于 Taq DNA 聚合酶在变性步骤中(约 94℃)不失活,可直接进入第二轮循环,因   此不必每轮循环时重新加入新酶,  这使得 Taq DNA 聚合酶成为 PCR 反应中的独特用酶。该制品可应   用于常规 PCR 扩增和大规模基因检测。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR 扩增完毕后可直接点样   于琼脂糖凝胶,无需再加入 DNA Loading Buffer。该制品以人基因组 DNA 为模板可很好的扩增 5kb    DNA 片段。由于 Taq 酶没有 3’至 5’的外切酶活性,因此在 DNA 聚合过程中相当于核苷酸转   移酶的作用,最终会导致 PCR 产物的 3’末端会产生 3’-dA overhangs  即产生带一个 A  3’ 粘端。

操作步骤

1. 室温融解 5×Effcient Taq PCR Mix (with Dye)。

2. 按下表配制反应体系并混合均匀:

5×Effcient Taq PCR Master Mix

10 μL

上游引物 (10 μM)

2μL

下游引物 (10 μM)

2μL

模板 DNA

1-500 ng

ddH2O

up to 50  μL

 

* 模板 DNA 用量参数 (50  μl 反应体系 )

 

 

 

模板 DNA

( 目的片段≤ 5 kb)

25-500 ng Genomic DNA

2-20 ng Plasmid DNA

1-2 μL cDNA from RT reaction

 

3. PCR 扩增循环参数

 

循环数

温度

时间

1st Cycle

95℃

2min

 

 

25-35 Cycles

95℃

10s

50~60℃

20s

72

2kb/1min

Last Cycle

72

5min

具体程序根据实际扩增情况而定。

4. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5  μL 进行电泳检测。

 

 

 
说明书:
 
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