检测用病毒核酸（DNA/RNA）提取试剂盒

货号	次数
NP11011	50次

试剂盒组成、储存、稳定性

试剂盒组成	保存	50 次 NP11011
裂解液 VLB	室温	25mL
去蛋白液 RE	室温	25mL
漂洗液 RW	室温	10 mL 第一次使用前按说明加指定量乙醇
RNase-free H2O	室温	10 mL
蛋白酶 K 溶液	4℃或者室温	1 mL
RNase-free 吸附柱 RNANE 和收集管	室温	50 套

存储事项

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

1. 蛋白酶 K 保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过 25℃室温至少保存 6 个月， 4℃保存 12 个月，－ 20℃保存 2 年。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍

本试剂盒适用于动物组织、血浆、血清、淋巴液、培养上清、分泌物、拭子、粪便、牛奶、尿液等样品中病毒核酸的提取，可同时提取样本中的 DNA 和 RNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，配合本公司独特的裂解液配方可以可最大限度的回收高纯度病毒核酸。提取的病毒 RNA/DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如反转录和 RT-PCR。

注意事项

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。

2. 冰箱内保存的样品，使用前将样品平衡至室温。

操作步骤

提示：

第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇 !

将样品平衡至室温。

1. 无细胞体液（例如：血浆 / 血清 / 淋巴液 / 无细胞体液 / 细胞培养上清液 / 尿液）：

a. 200μL 血清等体液（需回复到室温，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入 1.5mL 离心管，加入 400μL 裂解液 VLB，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

b. 室温 (15-25℃ ) 放置 10 分钟。

c. 加入 450μL 无水乙醇，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

注意：如果周围环境高 30℃,乙醇需要再在冰上预冷后再加入。

d. 立刻接操作步骤的步骤 5。

2. 粪便样品：

a. 取 500μL 0.5-1 mL 粪便样本悬浮于 5 mL 生理盐水中，彻底涡旋振荡混匀后， 4,000×g (6,000 rpm) 离心 20 min 后取上清 200μL 转入 1.5mL 离心管，加入 400μL 裂解液 VLB，

立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

b. 室温 (15-25℃ ) 放置 10 分钟。

c. 加入 450μL 无水乙醇，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

d. 立刻接操作步骤的步骤 5。

3. 鼻拭子 / 咽拭子：

a. 取样后与生理盐水或病毒运输液彻底颠倒或涡旋振荡混匀后取 200μL 转入 1.5mL 离心管，加入 400μL 裂解液 VLB，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

b. 室温 (15-25℃ ) 放置 10 分钟。

c. 加入 450μL 无水乙醇，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

d. 立刻接操作步骤的步骤 5。

4. 组织样本（气管、肺、喉头、脾脏、扁桃体、法氏囊、肾脏和淋巴结等）：

a. 选取病变明显的组织块剪取样品约 20mg（备注：A. 可选择多部位剪碎混匀后再取。B. 一粒大米重约 20mg。C. 请勿使用过量组织，影响提取效果），依次加入 150μL 裂解液 VLB、 450μL 实验室纯水或者去离子水（不用灭菌）和 20μL 蛋白酶 K，用眼科剪反复多次剪碎混匀或用电动匀浆器匀浆，置 56℃水浴中消化 15-30 分钟（视消化情况）后瞬时离心取上清。

b. 将上述处理后样本离心取上清 100μL 转入 1.5ml 离心管，加入 300μL 裂解液 VLB，立刻涡旋振荡充分混匀。

c. 加入 250μL 无水乙醇，立刻涡旋振荡 15 秒充分混匀。

d. 立刻接操作步骤的步骤 5。

5. 将混合物 ( 每次小于 720μL，多可以分两次加入 ) 加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 离心 1 分钟，弃掉废液。

确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。 6. 加 500μL 去蛋白液 RE，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。

7. 加入 500μL 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇 !）， 12,000rpm 离心 30 秒，弃废液，加入 500μL 漂洗液 RW，重复一遍。

8. 将 RNase-free 吸附柱 RNANE 放回空收集管中， 12,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出 RNase-free 吸附柱 RNANE，放入一个 RNase free 的离心管中，在吸附膜的中间部位加 30-50μLRNase free H20，室温放置 1 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 DNA/RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟。