全血/组织/细胞 DNA快速提取试剂盒 Whole blood＆tissue＆cell DNA Extraction Kit
| 货号 | 次数 |
| NP04013 | 200次 |
| NP04012 | 100次 |
| NP04011 | 50次 |
适用范围
适用于快速提取全血、各种动植物组织细胞基因组 DNA。
试剂盒组成、储存、稳定性
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试剂盒组成 |
保存 |
100 次（NP04012） |
200 次（NP04013） |
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平衡液 |
室温 |
10 mL |
20 mL |
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裂解液 TL |
室温 |
20 mL |
40 mL |
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缓冲液 BB |
室温 |
20 mL |
40 mL |
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结合液 CB |
室温 |
30 mL |
60 mL |
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抑制物去除液 IR |
室温 |
50 mL |
100 mL |
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漂洗液 WB |
室温 |
25 mL 第一次使用前用无水 乙醇稀释至 125mL |
25 mL×2 第一次使用前用无水 乙醇稀释至 125mL×2 |
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洗脱缓冲液 EB |
室温 |
15 mL |
30 mL |
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蛋白酶 K 溶液 （可选）20mg/mL |
4℃或者室温 |
1mL×2 |
1mL×4 |
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吸附柱 NE |
室温 |
100 个 |
200 个 |
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收集管（2mL） |
室温 |
100 个 |
200 个 |
本试剂盒在室温储存 24 个月不影响使用效果。
存储事项
裂解液 TL、结合液 CB、或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水 浴几分钟帮助重新溶解， 恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
蛋白酶 K 保存在即用型甘油缓冲液中， 常温运输。收到后， 不超过 25℃室温至少保存 6 个月， 4℃保存 12 个月， -20℃保存 2 年。
避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍
独特的结合液 / 蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组 DNA 在高离序盐 状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的， 抑制物去除液和 漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜 上洗脱。
产品特点
·不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等。
·快速，简捷，单个样品操作一般可在 30 分钟内完成。
· 多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量 200µl 全血可提取出 3-6µg，OD260/OD280 典型 的比值达 1.7~1.9， 长度可达 30 kb-50kb， 可直接用于 PCR、Southern-blot 和各种酶切反应。
·从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。
·典型的产量 200µL 全血可提取出 3-6µg 基因组 DNA。
注意事项
》 所有的离心均在室温完成， 使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机，如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
》 需要自备 1XPBS( 磷酸盐缓冲液 ), 和异丙醇。
》 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大， 因此产量的个体差异也可能非常大。
》 开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。
》 为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者 4℃存放少于 3 天的标本，不要使用反复冻融 超过 3 次的标本，否则会严重降低产量。
关于平衡液的使用
介绍
核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷 / 尘埃发生反应而影响其核酸的结合 能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从 而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液， 若不小心碰到， 请用大量自来水清洗。 用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至 37℃使 沉淀完全消失。
使用方法
（临用前才预处理） 取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中， 吸取 100µL 的平衡液至柱子 中。13000 rpm 离心 1 分钟， 倒掉收集管中废液， 将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处 理柱子完毕。接后续的操作步骤。
操作步骤（实验前请先阅读注意事项）
提示： 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在 方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入 !
平衡液预处理吸附柱备用：
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”
1. 全血
a. 取 200µL 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入 1.5mL 离心管。
如果全血起始量小于 200µL，则用缓冲液 BB 补足到 200µL。如果起始量介于 200µL- 300µL 之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于 300µL-1mL 之间， 则 需要先进行红细胞裂解操作。
如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此 处理量 5-20µL，可加缓冲液 BB 补足到 200μL 后进行后续步骤。
b. 加入 20µL 蛋白酶 K (20mg/mL) 溶液， 充分混匀， 再加入 200µL 结合液 CB， 立刻涡旋 振荡充分混匀， 在 70℃放置 10 分钟。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。
可选步骤，一般不需要 : 如果 RNA 残留较多，需要去除 RNA，可以在加入 200µL 结合液 CB 前加 20µL RNase A(25mg/mL) 溶液，振荡混匀，室温放置 5-10 分钟。
c. 冷却后加 100µL 异丙醇， 立刻涡旋振荡充分混匀， 此时可能会出现絮状沉淀。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品 粘稠不易混匀时可以涡旋振荡 15 秒混匀。
d. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 NE 中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 60 秒，倒掉收集管中的废液。
e. 接操作步骤项下 5。
2. 组织培养细胞
a. 收集约 105-106 悬浮细胞到一个 1.5mL 离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化 后吹打下来收集。
b.13,000rpm 离心 10 秒，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约 10-20µL 残留的液体。
c. 加 200µL 1XPBS 重悬洗涤细胞， 13,000rpm 离心 10 秒，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清 , 将细胞沉淀重悬于 180µL 1XPBS 中。
d. 加入 20μL 蛋白酶 K (20mg/mL) 溶液， 充分混匀， 再加入 200μL 结合液 CB， 立刻涡 旋振荡充分混匀， 在 70℃放置 10 分钟。
可选做步骤 : 如果 RNA 残留较多，需要去除 RNA，可以在加入 200μL 结合液 CB 前加 20μL RNase A(25mg/mL) 溶液，振荡混匀，室温放置 5-10 分钟。
e. 冷却后加 100μL 异丙醇， 立刻涡旋振荡充分混匀， 此时可能会出现絮状沉淀。
f. 将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱 NE 中， （吸附柱放入收集管中） 13,000rpm 离心 60 秒，倒掉收集管中的废液。
g. 接操作步骤项下 5。
3. 动植物组织（例如鼠肝脑或者植物叶片）
a. 将 20-50mg 新鲜或者解冻的组织用解剖刀切成小碎块（切成小块可以提高产量）或者在 液氮中研磨组织成细粉后， 转入装有 180μL 组织裂解液 TL 的 1.5mL 离心管中， 用大口径枪头 吹打混匀。
b. 加入 20μL 的蛋白酶 K 溶液 (20mg/mL)， 立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选做步骤 : 如果 RNA 残留较多， 需要去除 RNA， 可在完成步骤 c 后加 20μL RNase A(25mg/mL) 溶液，振荡混匀，室温放置 5-10 分钟。
d. 加入 200μL 结合液 CB， 立刻涡旋振荡充分混匀， 70℃放置 10 分钟。
e. 冷却后加 100μL 异丙醇， 立刻涡旋振荡充分混匀， 此时可能会出现絮状沉淀。
f. 用 1mL 的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱 NE 中，（吸附柱放入收集管中） 13,000rpm 离心 60 秒，倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合 物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。
g. 接操作步骤项下 5。
4. 动物组织（鼠尾）
a. 将 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖 ( 即 20-50mg) 剪碎（一定要剪 0-2cm 范围内的尾巴尖， 否则裂解效果不好），或者在液氮中研磨组织成细粉后， 转入装有 180μL 组织裂解液 TL 的 1.5mL 离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。
b. 加入 20μL 的蛋白酶 K(20mg/mL)， 立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在 55℃水浴 3 小时或者直到组织消化完全， 期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选做步骤 : 如果 RNA 残留较多， 需要去除 RNA， 可在完成步骤 c 后加 20μL RNase A(25mg/mL) 溶液，振荡混匀，室温放置 5-10 分钟。
d. 用一个 1mL 不带针头的一次性输液器抽打裂解物 2-3 次。
e. 加入 200μL 结合液 CB 和 100μL 异丙醇， 立刻涡旋振荡充分混匀。
f.13,000rpm 离 心 5 分 钟， 将上清加入 一 个吸附柱 NE 中， （吸附柱放入收集管中） 13,000rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。
g. 接操作步骤项下 5。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品 粘稠不易混匀时可以涡旋振荡 15 秒混匀。
5. 加入 500μL 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。
6. 加入 600μL 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇 !） ，12,000rpm 离心 30 秒， 弃掉废液。
7. 加入 600μL 漂洗液 WB，12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
8. 将吸附柱 NE 放回空收集管中， 13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液
中残留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱 NE，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 100μL 洗脱缓冲液 EB （洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热） ， 室温放置 3-5 分钟， 12,000rpm 离心 1 分钟。 将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最 小体积不应少于 50μL，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
10.DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在 -20℃。
- mL
