透明自封袋二根管

GFP 纳米抗体偶联磁珠 (ChIP级)

GFP 纳米抗体偶联磁珠 (ChIP级)
货号 规格
NT01032 500μL
NT01033 1mL  

产品规格

产品介绍

核小体研发的 GFP 纳米珠偶联了抗体家族的新成员:纳米抗体,其相对分子质量小、亲和力高、   稳定性高、特异性高、结合速度快, 在免疫沉淀研究和医学诊断、治疗方面有独特的优势, 备受学者青睐。

主要用途

IP/Co-IP/ChIP

独特优势

1. 免疫沉淀后,标签抗体在检测过程中没有普通抗体(IgG)重链、轻链的干扰。

2. 相对分子质量小:传统 IgG 抗体大小为 150KD,纳米抗体仅 15KD,是传统抗体的十分之一。避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

3. 亲和能力强:  该纳米抗体与标签蛋白的结合能力远远高于(>10 倍)普通的抗原 - 抗体(IgG抗体)结合能力;

4. 稳定性强:常规抗体热稳定性较差,而纳米抗体内部存在二硫键,能够在高温(90℃)环境下长期放置,并可重新获得生物活性。此外,其对在强变性剂的缓冲液中同样适用。

5.结合速度快:纳米抗体的 FR 区和 CDR 区为亲水性残基,  具有更好的可溶性和极强的穿透力,标签蛋白和纳米抗体的结合速度快。

6. 特异性高:纳米抗体高变区比常规抗体更长,  其更容易与抗原发生特异性结合,  且更紧密稳定。

GFP纳米抗体特异性检测

“+++”代表特异性高,结合能力强;“+”特异性差,依然能够结合、富集;

“-”不能结合或者没有鉴定。

去垢剂和盐浓度耐受能力强,兼容各类IP缓冲液

 

操作步骤

推荐实验步骤,可根据具体实验调整

1. 细胞样品蛋白 IP protocol(推荐使用)。

蛋白提取

每个 IP 反应推荐使用 ~10^6-10^7 细胞,也可根据目标蛋白丰度自行决定

1) 4° C 收集 ~10^6-10^7 细胞,并用 PBS 清洗一次;

2)  4° C 预冷的 200-500  μL 蛋白提取液充分重悬细胞,  4° C 充分裂解细胞 30 min,期 间每 5 min 混匀一次或者不停混匀;

3) 4° C 离心 13000 rpm 10 min,小心吸取上清,4° C 保存,待用。

平衡 beads

1)  充分混匀 beads,取适量 beads ( 见附件 3);

2)  加入 1 mL 预冷的蛋白稀释缓冲液,充分混匀平衡 beads,1500 g 收集琼脂糖珠,或用磁力 架收集磁珠,去上清

3)  重复步骤 2 两次,共平衡 beads 三次。

标签蛋白结合

1)  把蛋白提取液加入平衡后的 beads 中;

2)  4° C 颠倒混合、IP 一个小时(最短 15 分钟),使标签蛋白结合到 beads 上。

清洗 beads

1) 收集 beads,向 beads 中加入 1 mL 冷的清洗溶液,充分混匀(适当增加清洗溶液中去垢 剂和盐浓度或者增加清洗的时间可以降低非特异性结合);

2) 重复步骤一两次,共清洗 beads 3 次;

3) 充分吸尽溶液,保留 beads。

结合蛋白复合体的洗脱

1)  加入适量的 2x SDS loading dye 充分重悬 beads;

2)  95° C 煮 beads 5 min

3)收集 beads;

4)上清用于后续的 SDS-PAGE / Western Blot

2. 植物蛋白的提取和富集。

每个 IP 反应推荐使用 1 g 植物材料,也可根据目标蛋白丰度自行决定,有很多用 100 mg 材料成功的例子。

3. GFP 纳米珠参照使用量

GFPAgarose Nanobeads ( 琼脂糖纳米珠 ) 40 μL/IP

GFP Magnetic Nanobeads ( 纳米磁珠 ) 20  μL/IP

注:体积为纯 beads 的体积

4. Beads 的检测

1)  分别取体外纯化的 GFP 蛋白 500 ng,  100 ng, 20 ng 加入到 1 mL 蛋白提取液中(50mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA pH 8.0, 0.5% IGEPAL CA-630, with PMSF and Cocktail);

2)  分别加入推荐用量的 beadsAgarose Nanobeads 40  μL/IPMagnetic Nanobeads 20 μL/IP;

3)  4° C 30 rpm 持续混匀 30 min;

4)  用蛋白提取液清洗 beads 3 次;

5)  充分吸尽上清;

6)  60 μL 2x SDS loading dye 充分重 beads;

7) 95° C 煮 beads 5 min

8)收集 beads

9) 取 10  μL 上清用于 SDS-PAGE / Western Blot, 分别取 500, 100, 20 ng GFP 蛋白作为 Input Control。

 

 

说明书:

 

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