GFP 纳米抗体偶联琼脂糖珠 (ChIP级)
| 货号 | 规格 |
| NT02033 | 1mL(1000μL） |
| NT02032 | 500μL |
产品规格
产品介绍
核小体研发的 GFP 纳米珠偶联了抗体家族的新成员：纳米抗体，其相对分子质量小、亲和力高、 稳定性高、特异性高、结合速度快， 在免疫沉淀研究和医学诊断、治疗方面有独特的优势， 备受学者青睐。
主要用途
IP/Co-IP/ChIP
独特优势
1. 免疫沉淀后，标签抗体在检测过程中没有普通抗体（IgG）重链、轻链的干扰。
2. 相对分子质量小：传统 IgG 抗体大小为 150KD，纳米抗体仅 15KD，是传统抗体的十分之一。避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. 亲和能力强： 该纳米抗体与标签蛋白的结合能力远远高于（>10 倍）普通的抗原 - 抗体（IgG抗体）结合能力；
4. 稳定性强：常规抗体热稳定性较差，而纳米抗体内部存在二硫键，能够在高温（90℃)环境下长期放置，并可重新获得生物活性。此外，其对在强变性剂的缓冲液中同样适用。
5．结合速度快：纳米抗体的 FR 区和 CDR 区为亲水性残基， 具有更好的可溶性和极强的穿透力，标签蛋白和纳米抗体的结合速度快。
6. 特异性高：纳米抗体高变区比常规抗体更长， 其更容易与抗原发生特异性结合， 且更紧密稳定。
GFP纳米抗体特异性检测
“+++”代表特异性高，结合能力强；“+”特异性差，依然能够结合、富集；
“-”不能结合或者没有鉴定。
去垢剂和盐浓度耐受能力强，兼容各类IP缓冲液
操作步骤
推荐实验步骤，可根据具体实验调整
1. 细胞样品蛋白 IP protocol（推荐使用）。
蛋白提取
每个 IP 反应推荐使用 ~10^6-10^7 细胞，也可根据目标蛋白丰度自行决定
（1） 4° C 收集 ~10^6-10^7 细胞，并用 PBS 清洗一次；
（2） 用 4° C 预冷的 200-500 μL 蛋白提取液充分重悬细胞， 4° C 充分裂解细胞 30 min，期 间每 5 min 混匀一次或者不停混匀；
（3） 4° C 离心 13000 rpm 10 min，小心吸取上清，4° C 保存，待用。
平衡 beads
（1） 充分混匀 beads，取适量 beads ( 见附件 3)；
（2） 加入 1 mL 预冷的蛋白稀释缓冲液，充分混匀平衡 beads，1500 g 收集琼脂糖珠，或用磁力 架收集磁珠，去上清
（3） 重复步骤 2 两次，共平衡 beads 三次。
标签蛋白结合
（1） 把蛋白提取液加入平衡后的 beads 中；
（2） 4° C 颠倒混合、IP 一个小时（最短 15 分钟），使标签蛋白结合到 beads 上。
清洗 beads
（1） 收集 beads，向 beads 中加入 1 mL 预冷的清洗溶液，充分混匀（适当增加清洗溶液中去垢 剂和盐浓度或者增加清洗的时间可以降低非特异性结合）；
（2） 重复步骤一两次，共清洗 beads 3 次；
（3） 充分吸尽溶液，保留 beads。
结合蛋白复合体的洗脱
（1） 加入适量的 2x SDS loading dye 充分重悬 beads；
（2） 95° C 煮 beads 5 min；
（3）收集 beads；
（4）上清用于后续的 SDS-PAGE / Western Blot。
2. 植物蛋白的提取和富集。
每个 IP 反应推荐使用 1 g 植物材料，也可根据目标蛋白丰度自行决定，有很多用 100 mg 材料成功的例子。
3． GFP 纳米珠参照使用量
GFPAgarose Nanobeads ( 琼脂糖纳米珠 ) 40 μL/IP
GFP Magnetic Nanobeads ( 纳米磁珠 ) 20 μL/IP
注：体积为纯 beads 的体积
4. Beads 的检测
（1） 分别取体外纯化的 GFP 蛋白 500 ng, 100 ng, 20 ng 加入到 1 mL 蛋白提取液中（50mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA pH 8.0, 0.5% IGEPAL CA-630, with PMSF and Cocktail）;
（2） 分别加入推荐用量的 beads（Agarose Nanobeads 40 μL/IP，Magnetic Nanobeads 20 μL/IP）;
（3） 4° C 30 rpm 持续混匀 30 min;
（4） 用蛋白提取液清洗 beads 3 次；
（5） 充分吸尽上清；
（6） 用 60 μL 2x SDS loading dye 充分重悬 beads；
（7） 95° C 煮 beads 5 min；
（8）收集 beads；
（9） 取 10 μL 上清用于 SDS-PAGE / Western Blot, 分别取 500, 100, 20 ng GFP 蛋白作为 Input Control。
说明书：
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