SYBR Green qPCR Mix (定量PCR预混液,2×)
| 货号 | 规格 |
| NL02021 | 1mL/管 |
| NL02022 | 100mL/瓶 |
试剂盒组成、储存、稳定性
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试剂盒组成 |
保存 |
规格 |
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2× SYBR Green qPCR Mix |
-20℃ |
1mL/ 管 |
储存事项
(1) 长期保存，请避光置于 -20℃可保存 3 年，或 -80℃长期保存。
(2) 经常使用，融化后可置于 4℃,可保存 1 年。
(3) 长期 -20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。
产品介绍
本产品是采用 SYBR Green 嵌合荧光法进行 Real-Time PCR 的专用试剂，其中第三代 SYBR Green qPCR 预混液 (2×) 是将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试 剂预混的 2× 浓度的单组分预混试剂。进行实验时， PCR 反应液的配制十分方便简单， 只需加入引物、模板、水即可。
产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶， 同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力， 其对乙醇、 胍盐、肝素等具有极高的耐受性，因此对于纯度较差的 DNA 模板，该 Mix 仍然可以获得理想的实验结果。 该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100% 无活性，因此可在室温建立反应体系， 只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力， 从而启动 PCR 扩增，提高 PCR 扩增的特异性。 能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。随着热循环的不 断进行， 剩余的酶活会源源不断地释放出来， 这就使得此酶克服了常规 Taq 酶容易出现平台期的弊端， 其扩增效率大大提高， 提高特异性 PCR 产物的产量、准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
该制品配有单独的 ROX 内参染料，使得该试剂可应用于所有 RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR(Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (RocheDiagnostics)；Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-TimePCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日 ) 等。
操作步骤
1. 根据机型选择步骤 A 或 B
A: 需 要 添 加 ROX 染 料 进 行 反 应 孔 间 信 号 矫 正 的 Real-Time PCR 仪， 包 括：ABI PRISM7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (AppliedBiosystems)；Mx3000P (Stratagene) 等。
按照如下组分配制 20 μL PCR 反应体系：
终浓度
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2× SYBR Green qPCR Mix |
10 μL |
1× |
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50×ROX Reference Dye |
0.4μL |
1× |
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PCR Forward Primer (10 μM) |
0.2~0.8 μL |
0.1~0.4 μM |
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PCR Reverse Primer (10 μM) |
0.2~0.8 μL |
0.1~0.4 μM |
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DNA 模板 |
0.5~2 μL |
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ddH2O |
Up to 20 μL |
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B: 无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)； EcoqPCR（Illumina）；Line-Gene(Bioer，杭州博日 ) 等。
按照如下组分配制 20 μL PCR 反应体系：
终浓度
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2× SYBR Green qPCR Mix |
10 μL |
1× |
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PCR Forward Primer (10 μM) |
0.2~0.8 μL |
0.1~0.4 μM |
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PCR Reverse Primer (10 μM) |
0.2~0.8 μL |
0.1~0.4 μM |
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DNA 模板 |
0.5~2 μL |
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|
ddH2O |
Up to 20 μL |
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2. 进行 Real-Time PCR 反应 , 通常采用两步法，程序如下：
Stage 1: 95℃ 5 min*
Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles (ABI 7500 普通模式为 60℃ 30s) Stage
3: 溶解曲线（该步骤使用 PCR 仪器默认程序即可）
注意：由于该酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的 活性，该热启动步骤不能缩短时间。
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。
- mL
