探针法全部

多重探针qPCR预混液(2×)/2×Multiplex probe qPCR Mix

货号 规格
NL04021 1mL/管
NL04022 100mL/瓶

 

 

试剂盒组成、储存、稳定性

 

试剂盒组成

保存

规格

Multiplex Taqman qPCR MIX

-20℃

1mL/ 管

 

储存事项

长期储存置于 -20℃以下,可保存 3 年;短期使用置于 4℃,可保存 3 个月。

产品介绍

DNA 聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量,这些特点使得本  系列产品可用于粗制样品的直接扩增,无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰,采用专有的热启动技术  确保 50℃以下 100% 无活性,因此可在室温建立反应体系。热启动配方中,酶是结合在一个特定载体上, 使其在第一部变性之前一直保持灭活状态,只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力,从  而启动 PCR 扩增,这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加,提高 PCR   增的特异性、PCR 产物的产量、   准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液,  可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

 Multiplex Taqman qPCR MIX 将热启动 DNA 聚合酶、反应 BufferdNTP 染料等试剂预 混在一起,是一种 2× 浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正染料,适用于各种荧光标记 探针,并且适用于各种定量 PCR 机型。优化的反应缓冲液,使得该制品不仅可用于单重的探针法定量PCR, 还允许进行多重定量 PCR(MultiPlex qPCR)检测, 该制品可进行 4 重以上的定量 PCR 检测。

DNA 聚合酶对抑制物耐受性:

SDS

0.01%

Serum

2%

EtOH

5%

Plasma Citrate

2%

Heparin

0.1IU/mL

Gua SCN

0.25%

Hematin

30uM

Trizol

0.5%

 

操作步骤

1. 按下表配制反应体系并混合均匀:

终浓度

Multiplex Taqman qPCR MIX

10μL

Primer F1 (20  μM)

0.1-0.4 μL

0.1-0.4 μM

Primer R1 (20  μM)

0.1-0.4 μL

0.1-0.4 μM

Probe1 (20  μM)

0.1-0.4 μL

0.1-0.4 μM

其它引物和探针

X

 

模板 DNA

0.5~2 μL

 

ddH2O

up to 20 μL

 

 

关于引物和探针的使用说明:

1)在进行单重 qPCR 检测时,通常引物和探针用量在 0.2  μL(0.2  μM)时一般具有较高 的效果。

2)在进行多重定量 PCR 时,通常首先进行单重检测,通过单重检测结果来评估引物和探针的 效率、特异性等情况后,再进行引物、探针组合进行多重检测。

2. 进行 Real-Time PCR 反应 , 通常采用两步法,程序如下:

循环数

温度

时间

热启动

95℃

5 min

 

40 Cycles

95℃

5 s          变性

60℃

30 s       收集信号,退火 / 延伸

注意:退火延伸温度可在 55-65℃调整

3. 在多数情况下,采用两步法程序可获得理想的扩增效果,在无法达到预期理想效果的情况下, 也可采用三步法 PCR 程序,程序如下:

循环数

温度

时间

热启动

95℃

5min

 

 

40 Cycles

95℃

5s       变性

55℃

10s       退火

72

30s       延伸

 

4. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲线。

 

 
说明书:
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