miRNA 产品使用说明
miRNA mimic 是 miRNA 模拟物化学合成的成熟 miRNA 双链，即用型
miRNA inhibitor 是 miRNA 抑制物化学修饰的成熟 mi RNA 互补单链，即用型
miRNA agomir 是特殊化学修饰的 miRNA 激动剂适用于细胞、动物实验，即用型
miRNA ant agomir 是特殊化学修饰的 miRNA 拮抗剂适用于细胞、动物实验，即用型
注：如需进行高内涵筛选试验，可进行 miRNA library。
使用前须知
产品以冻干粉的形式提供，由于影响结晶形态的因素很多，产品外观有些差异，甚至形态无法用肉眼可见。此为正常现象。
为避免外界因素（包括酶，极端 pH 或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA 操作规则。实验过程中，产品最好于冰上放置，使用完毕后请于-20℃~-80℃小心保存。
细胞实验方法：
为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验的可靠性和可重复性，一般建议：
1）转染实验中每个转染样品至少设置 3 个复孔；
2）接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，且细胞在各孔的表面平均分布。
1.转染浓度
miRNA 产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。中实同创推荐的 miRNA mimic 初始浓度为 50nM，miRNA inhibitor 浓度为 100nM，客户可根据实验具体情况优化转染浓度，优化的范围建议为 10~200nM。
注：miRNA inhibitor 往往需要用到较大的用量才能观察到较好的抑制效果，相当于 miRNA mimic 的几倍用量，这可能与 miRNA inhibitor 竞争性抑制的作用机制及作用效率有关。因此， 当使用推荐的转染浓度没有获得预期效果时，可适当选择更高的浓度或选择 antagomir进行实验。
2.转染方法
以 Reagent 转染 miRNA mimic 于 24 孔板，转染浓度为 50nM 为例，其他规格容器的试剂用量请参考表 2 ，若使用其它转染试剂，请参考对应转染试剂说明书。
1）接种细胞
a. 贴壁细胞：以 Hela 细胞为例，接种 1× 105~5 × 105 个细胞至含有适量完全培养基的 24 孔板 培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到 30~50%。
b. 悬浮细胞：以 THP1 细胞为例，接种 1× 105~5 × 105 个细胞至含有适量完全培养基的 24 孔板培养孔中。
注：1)不同细胞生长速度不同，接种数量及密度需依据细胞类型，培养时间，实验目的而且 2每孔接种的细胞数量应尽量相同，使细胞均匀分布。
2）转染
对于每个转染样品，请按以下步骤准备：
a. 稀释 mimic：用 30μl 1× Buffer 稀释 1.25μl 20μM miRNA mimic 轻轻混匀。 b. 混合液制备：加入 3μl Reagent ，轻轻吹打混匀，室温孵育 0～15min。
注：1）请勿振荡，溶液可能会有浑浊，但不会影响转染；2）混合液可室温放置一段时间，但不宜超过 24h。
c. 将混合液加入到无双抗完全培养基中，轻轻混匀。
注：混合液加入至原细胞培养基，一般无需移除或更换，但需依据客户具体实验情况而定。 d. 或者进行其他必要的特殊处理（如加药处理）。
e. 将培养板置于 37℃的 CO2 培养箱中培养 24~96h（培养时间与实验目的相关）。
表 2 转染 miRNA mimic 用量参考
注：实验参考用量示例 对于部分细胞类型需要进一步优化
