siRNA 使用说明
常规化学合成 siRNA 为 21-25nt 的双链小分子 RNA 。即用型的 siRNA，已经经过纯化、 退火等处理，只要用 DEPC 水溶解并配制成 20µM 液体即可直接转染细胞。 产品剂型为冻 干粉，产品剂量经过严格测算，以摩尔数标明。
产品简介：
常规化学合成 siRNA 为 21-25nt 的双链小分子 RNA 。即用型的 siRNA，已经经过纯化、 退火等处理，只要用 DEPC 水溶解并配制成 20µM 液体即可直接转染细胞。 产品剂型为冻 干粉，产品剂量经过严格测算，以摩尔数标明。
保存：产品以冻干粉的形式，常温运输，常温下一两周内稳定。收到产品后，请于-20℃至-80℃ 保存。
液体剂型： siRNA 的贮存浓度一般为 20µM，应避免反复冻融避免反复冻融(尽量不要超过 5 次)，建议溶解后的产品分装保存分装保存分装保存，-20℃~ -80℃保存半年以上。如果近期 不做实验，产品需长期放置，最好以冻干粉形式保存。
冻干粉剂型： -20℃~-80℃保存一年以上。开盖前，请先稍稍离心，将粉末收集于管底，再用 DEPC 水，配制成 20µM 的液体剂型。
使用： 产品使用时，siRNA 最好冰上放置，使用完毕后，请于-20℃或-80℃小心保存;整个实 验过程，要求无 RNA 酶环境，与产品接触的枪头、EP 管等都应该经过无酶处理；
特别提示：荧光标记 siRNA 要求避光。若用 FAM 等绿色荧光对照，请注意 Lipofectamine RNAiMAX 对绿色荧光有一定的遮盖效应，对红色荧光对照没有影响。
转染方法（仅供参考）：
1. siRNA 的转染浓度：推荐的转染浓度是 50nM ，可具体情况优化转染浓度，最佳转染浓度 一般设置浓度梯度和时间曲线进行测试，建议优化的转染梯度为 100nM，50nM，20nM，10nM，5nM，1nM。
2. 使用 RNAiMAX Transfection Reagent (Invitrogen)转染 siRNA 的步骤：
转染方法请参考转染试剂的使用说明，以下是使用 RNAiMAX Transfection Reagent (以下称 RNAiMAX) 转染的参考方法。
(1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染时的细胞密度能够达到 30~50％(不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验)，请使 用无抗生素的培养基。
注意：转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细胞活力，从 而降低细胞的转染效率。而细胞密度过低则可能达不到生长的要求，也会因此影响转染效率。 (2) 对于每个转染样品，按如下步骤准备 siRNA-RNAiMAX 混合液：
a. 稀释转染试剂 RNAiMAX：使用前，将 RNAiMAX 转染试剂轻轻摇匀，然后取适量，用不 含血清的优化培养基(Opt i-MEM I Reduced Serum Medium)稀释，轻轻混和，室温孵育 5min； b. 稀释 siRNA：用 Opt i-MEM I Reduced Serum Medium 稀释 siRNA，轻轻混和；
c. 稀释好的 RNAiMAX 经过 5min 的孵育后，与上述(b)稀释好的siRNA 轻轻混和，室温培 养 20min 以形成 siRNA-RNAiMAX 混和物，溶液可能会有浑浊，不过不会影响转染。
注意：稀释好的 RNAiMAX，如果长时间放置可能导致转染试剂活性的降低，应尽量在尽量在 30min 之内之内与稀释好的 siRNA 混和。
(3) 将 siRNA-RNAiMAX 混合液加入含有细胞以及培养液的细胞培养板中，轻轻摇晃，使之
混和；
(4) 将培养板置于 37 ℃的 CO2 培养箱中培养至检测时间(24~96h) 。沉默效率的检测一般建 议的时间为 24~72h。
