高效组织 细胞 miRNA 提取试剂盒 ZS-M15005
Superbrilliant® 高效组织/细胞 miRNA 提取试剂盒
Superbrilliant® High-efficient Tissue/Cell miRNA Extraction Kit
Cat. No.: ZS-M15005
Superbrilliant® High-efficient Tissue/Cell miRNA Extraction Kit
Cat. No.: ZS-M15005
组分：
储存：室温可保存 2 年。
简介：该试剂盒操作步骤简单、重复性好、miRNA 产率高。该试剂盒中的裂解液是经过长时间研发改良的，具有一般裂解液不具有的裂解能力和提取灵敏度，试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜填料，大大增强了其对 RNA 的吸附能力，尤其是 small RNA（<200nt）。使用该试剂盒提取的小 RNA（Small RNA）中，长度在 15～200nt 范围的 RNA 在 95%以上，基本不含有大 RNA 和 DNA。本产品通过一步上柱即可获得高纯度的 miRNA，可在 45 min 内完成小 RNA 的提取。该试剂盒广泛适用于动物组织、细胞和多糖多酚含量不高的植物组织样本。 经本制品提取的 Small RNA 纯度高，可以除去大部分 28S 和 18S 大片段 RNA、蛋白质及基因组 DNA。大幅度提高产物的纯度和产量，操作简便，兼容性强。提取的 RNA 没有DNA 和蛋白污染，可应用于后续分子杂交, 实时定量 PCR 和 miRNA 芯片等分子生物学实验。
使用防护建议：miRNA 裂解液 A 溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再及时就诊。
样本使用量及小 RNA 产量
自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇、植物组织需另备β-巯基乙醇。
操作方法：
1. 组织样本提取
(1) 向 1.5ml EP 管中加入 300μl miRNA 裂解液 A。植物组织则再加入 10μl β-巯基乙醇，混合均匀。
(2) 在液氮条件下充分将组织研磨粉碎，将一定的样品量（见样本使用量表）研磨成粉状的组织加入到上述 300μl miRNA 裂解液 A 中，立即剧烈震荡至组织粉末彻底溶解于裂解液中。室温静置 5min 以充分裂解细胞。
注意：将组织加入到 miRNA 裂解液 A 后要迅速将组织震散，否则易引起组织成团状，不容易裂解。如发生成团状，务必用移液器将团状组织吹打松散。
(3) 向上述裂解完毕的裂解液中加入 350μl miRNA 吸附液 B，上下颠倒混合均匀。13,000 rpm离心 5min，吸取 550μl 上清液，转移到新的 1.5 ml EP 管中。
(4) 向上述溶液中加入 200μl 无水乙醇，用力震荡数次，室温放置 5 min。
(5) 13,000 rpm 离心 10 min，转移 700μl 上清液到新的 1.5 ml EP 管中。
(6) 向上述溶液中加入 300μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
(7) 分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(8) 向吸附柱中加入 700μl 75%异丙醇洗涤一次，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(9) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(10) 吸附柱 13,000 rpm 空离心 2 min，去掉残留的乙醇。
(11) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中，室温放置 2 min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上
加入 30μl Rnase free TE Buffer，室温静置 2min，13,000rpm 离心 2min，洗脱产物即为提
取的 miRNA。通常取 1～2μl 该产物，即可使用 SuperbrilliantTM miRNA 反转录试剂盒
（TaqMan 法）进行反转录反应（货号：ZS-M15004）。
2. 细胞样本提取
(1) 贴壁细胞：胰酶消化细胞后，离心收集细胞沉淀。用 100μl 1×PBS 重悬细胞后，加入 300μl
miRNA 裂解液 A 颠倒混合均匀，室温放置 5 min。
(2) 悬浮细胞：直接离心后，收集细胞沉淀。用 100μl 1×PBS 重悬细胞后，加入 300μl miRNA
裂解液 A 颠倒混合均匀，室温放置 5 min。
(3) 向上述裂解完毕的裂解液中加入 250μl miRNA 吸附液 B，上下颠倒混合均匀。13,000 rpm
离心 5 min，吸取 550 μl 上清液，转移到新的 1.5 ml EP 管中。
注意：加入细胞体积数与 miRNA 吸附液 B 总体积数为 350μl。如加入 50μl 细胞，则 miRNA
吸附液 B 使用 300μl。
(4) 向上述 550μl 上清溶液中加入 200μl 无水乙醇，用力震荡数次，室温放置 5 min。
(5) 13,000 rpm 离心 10 min，转移 700μl 上清液到新的 1.5 ml EP 管中。
(6) 向上述溶液中加入 300μl 异丙醇，用力上下颠倒数次。
(7) 分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(8) 向吸附柱中加入 700μl 75%异丙醇洗涤一次，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(9) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次，13,000 rpm 离心 1 min，倒掉过滤液。
(10) 吸附柱 13,000 rpm 空离心 2 min，去掉残留的乙醇。
(11) 将吸附柱放入到新 1.5 ml EP 管中，室温放置 2 min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl Rnase free TE Buffer，室温静置 2 min，13,000 rpm 离心 2 min，洗脱产物即为提取的 miRNA。通常取 1～2μl 该产物，即可使用 SuperbrilliantTM miRNA 反转录试剂盒（TaqMan 法）进行反转录反应（货号：ZS-M15004）。
常见问题汇总：
(1) 本方法提取的小 RNA，95％以上为小 RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt 的 RNA，通常残留的>200nt RNA 不影响后续试验操作。
(2) 本试剂盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的 RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
(3) 使用本试剂盒提取的 miRNA 浓度通常在 50ng/μl 左右，取 5～10μl 即可用于电泳检测。取 1~2μl 即可用于 SuperbrilliantTM miRNA 反转录试剂盒（TaqMan 法）进行反转录反应（货号：ZS-M15004）。
Fig 1. 使用该试剂盒提取的 MDA-MB-231 细胞 RNA，反转录后进行 miR-21 基因的 qPCR现价：
¥
636.00
原价：
¥748.00
