miRNA反转录试剂盒ZS-M15003

miRNA 反转录试剂盒 ZS-M15003

Superbrilliant® miRNA 反转录试剂盒(TaqMan 法 适用于血清血浆样本)
Superbrilliant® TaqMan miRNA Reverse TranscriptionKit(Serum/Plasma)

Cat. No.: ZS-M15003
组分:
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融。
 
简介:SuperbrilliantTM miRNA 反转录试剂盒(TaqMan 法适用于血清血浆样本)专用于血清血浆 miRNAs 分子的反转录试验(不可用于组织和细胞),转录获得cDNA 产物用于 TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子(仅适用SuperbrilliantTM TaqMan miRNA 定量 PCR 预混液,货号:ZS-M15002,配合SupersmartTM TaqMan miRNA 定量 PCR 探针使用,货号:ZS-MT-XXXXX 使用)。SuperbrilliantTM miRNA 反转录试剂盒(TaqMan 法适用于血清血浆样本)采用加
A 法进行反转录,加 A 法的反转录效率远高于茎环法,因此,采用该方法可极大的提高检测灵敏度(原理见图 1)。该试剂盒操作简单,仅需要两步即可轻松完miRNA cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行 PCR 扩增,FAM 标记TaqMan 探针作为荧光报告基团进行定量检测(原理见图 1)。
1SuperbrilliantTM TaqMan miRNA 定量检测原理
 
操作方法
1 按以下组分在 0.2ml EP 管中配制应液

3 反应完毕后,在上述 12.5μl 反应体系中加入如下试剂,并混合均匀。

4 PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:

获得的 cDNA 产物可用于多个目标 miRNA 的检测。通常取 2μl 即可用于SuperbrilliantTM TaqMan miRNA 定量 PCR 预混液检测(货号:ZS-M15002,配SupersmartTM TaqMan miRNA 定量 PCR 探针使用,货号:ZS-MT-XXXXX使用,该探针有一万余种,详细列表可查询 SuperbrilliantTM TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。
5 利用 SuperbrilliantTM TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒对上述 miRNA cDNA产物进行 RealTime PCR 检测内参基因可选择使用:SuperbrilliantTM TaqMan hsa-miR-16 定量 PCR 试剂盒(用于全血样本) (货号:ZS-MT-miR-16)SuperbrilliantTM TaqMan cel-miR-39 PCR 探针(适用于全血样本)(货号:ZS-MT-cel-miR-39)
1)配制反应体系
按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系:

2)进行 Real-Time PCR 反应
通常采用两步法,程序如下:
反应结束后确认 Real-Time PCR cDNA 样品和 NTC 阴性对照的扩增曲线(hsa-miR16)

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