Annexin VPI 双染细胞凋亡检测试剂盒 ZS-C31001
Superbrilliant®Annexin V/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒
Superbrilliant®Annexin V/PI Double Staining Cell Apoptosis Detection Kit
Cat.No.: ZS-C31001
Superbrilliant®Annexin V/PI Double Staining Cell Apoptosis Detection Kit
Cat.No.: ZS-C31001
组分:
储存： 2～8℃，有效期 1 年。
简介：细胞凋亡（Apoptosis）是由基因控制的细胞自主的有序性死亡，又称为程序性细胞死亡（Programmed Cell Death），在机体发育、组织稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin V/PI 双染法是根据凋亡细胞出现细胞膜的不对称性丧失，即磷脂酰丝氨酸（Phosphatidyl serine，PS）由膜内向膜外翻转原理所建立。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸 PS 高亲和力特异性结合。Annexin V 是检测早期细胞凋亡的最灵敏指标之一，以标记了 FITC的 Annexin V 作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期和死细胞由于细胞膜破裂，因此 PI 能够将细胞核染红。将 AnnexinV与 PI 匹配使用，若横坐标表示 Annexin V 信号，纵坐标表示 PI 信号，则左下象限 (Annexin V-/PI-) 代表活细胞；右下象限(Annexin V+ /PI-) 代表早期凋亡细胞；右上象限(Annexin V+ /PI+)代表凋亡晚期细胞和坏死细胞；左上象限(AnnexinV-/PI+) 被认为是许可范围内的检测误差。
本试剂盒使用改进型的高纯度 FITC 染料，其在红色通道（690nm）无发射光，因此极大的减少了对红色通道的干扰。使用该试剂盒进行细胞凋亡检测时荧光相互干扰更小、检测更准确。
注意事项
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应 1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10× Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1：9）稀释至 1×备用。
6.注意避免反复冻融
7.如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
8.如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解 Annexin V-FITC，导致染色失败。
9.用于流式细胞仪检测时，如果发现 Annexin V-FITC 单独染色时出现了过多的PI 假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也 无法改善，可以用 PBS 将Annexin V-FITC 稀释 3-10 倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
操作步骤
1. 贴壁细胞：用胰酶消化至单细胞悬液； 悬浮细胞：可直接使用。
2. 1000 rpm（400g），离心 5 min，弃上清。
3. 加入 1 ml PBS，轻轻吹打使细胞悬浮，1000rpm，离心 5 min，弃上清。
4. 再重复步骤 3 一次，尽可能吸除多余的 PBS 溶液；
5. 加入 1× Annexin V Binding Buffer 重悬细胞，使细胞密度为 0.2～1×10 6个/ml。
注意：a.必须使用 1× Annexin V Binding Buffer 重悬细胞（不可使用 PBS 重悬，否则会导致 Annexin V 无法结合 PS 位点）；
b.将细胞悬液用 200 目筛网过滤一次，再进行下述操作将有助于获得最佳试验结果。
6. 取 100 μl 上述细胞重悬液，加入 5 μl Annexin V-FITC、5 μl PI Staining Solution 混合均匀，室温避光放置 15 min。
7. 反应结束后加 400 μl Binding Buffer 轻轻混匀在 1 小时内上流式细胞仪检测。
注意：a. 流式细胞仪要求配备 488 nm 激发光源；FITC 使用绿色通道检测（525nm）；PI 推荐使用红色通道检测（690 nm）， PI 也可使用黄色通道检测（580nm），但黄色通道必须进行荧光补偿操作。
b. 本试剂采用高纯度改进型 FITC 染料，其无法在红色通道检测，因此采用绿色通道和红色通道进行检测时，通常无需荧光补偿操作。
8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。
现价：
¥
719.00
原价：
¥798.00
