WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液 ZS-PR21001
Superbrilliant® WB High quality Super RIPA lysis buffer
Cat. No.: ZS-PR21001
组分:
储存:常温保存,可保存 2 年。
根据试验情况推荐选择组合
蛋白酶及磷酸酶抑制剂组分及抑制性能
简介:WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可 溶性蛋白,是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳 动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。本产品可以用于 动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay 。提取的蛋白可用于 SDS-PAGE 、Western Blot、 ELISA、酶活性分析等后续实验。
用途:用于 Western Blot 杂交的蛋白样品提取,可高效提取细胞膜、胞浆、细 胞核蛋白。不能用于 Co-IP/IP 试验。
制备 Western Blot 杂交蛋白样品
1. 对于培养细胞样品 (0.5~10× 106个) :
(1). A: 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中, 加入蛋白酶抑制剂混合物 A (ZS-PR22005),使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液,加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A,混合均匀,待用。 B: 磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中,加入 蛋白酶抑制剂混合物 A 、磷酸酶抑制剂混合物 B 、磷酸酶抑制剂混合物 C (ZS-PR22006)各 2.5 μl,使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液, 加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A、2.5 μl 磷酸酶抑制剂混合物 B 、2.5 μl 磷酸 酶抑制剂混合物 C,混合均匀,待用。
注意:加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 WB Super RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2 个月,性能不会有下降;加入 Benzonase 核酸酶 (ZS-PR23001) 至终 浓度为 0.25 U/μl,可有效降低样品粘度提高蛋白提取效率。
(2). 离心收集细胞,弃上清。加入 250 μl上述配制好的裂解液,枪头或旋涡振荡 混合均匀。冰上放置 30min。
(3). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
2. 对于组织样品:
(4). 组织用研钵 (或匀浆器) 研磨充分至细小颗粒。
(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充 分可以适当增加裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用 量),冰上放置 30min。
(6). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒(ZS-PR25001)测定蛋白浓度。
Fig1. MDA-MB231 细胞 6× 105 细胞/管,每管加入 100 ul 裂解液,冰上孵育 15 min, 收集上清获取蛋白。20 mg 乳腺癌组织加入 400 ul RIPA,超声破碎获取蛋白。 100°C 煮 10 分钟使之变形,ECL 显影。