IP 超能高效 RIPA 裂解缓冲液 ZS-PR21002
Superbrilliant® IP RIPA Lysis Buffer
Cat. No.: ZS-PR21002
组分:
储存:4°C,可保存 2 年。
根据试验情况推荐选择组合
蛋白酶及磷酸酶抑制剂组分及抑制性能
简介:IP 超能高效 RIPA 裂解缓冲液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。 主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和 悬浮细胞。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细 菌样品。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay 。可以用于免疫沉淀(immunol precipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP)。
制备 Co-IP/IP 蛋白样品
1. 对于培养细胞样品 (0.5~10× 106 个) :
(1). A: 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 IP RIPA 裂解液中,加入蛋白 酶抑制剂混合物 A (ZS-PR22005),使其最终浓度为 1 × 。如 250μl IP RIPA 裂解液,加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A,混合均匀,待用。
B: 磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 IP RIPA 裂解液中,加入蛋白酶抑 制剂混合物 A 、磷酸酶抑制剂混合物 B 、磷酸酶抑制剂混合物 C (ZS-PR22006) 各 2.5 μl,使其最终浓度为 1 × 。如 250μl IP RIPA 裂解液,加入 2.5 μl 蛋白酶 抑制剂混合物 A、2.5 μ磷酸酶抑制剂混合物 B、2.5 μl 磷酸酶抑制剂混合物 C,混 合均匀,待用。
注意:加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 IP RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2个月,性能不会有下降。
(2). 离心收集细胞,弃上清。加入 250 μl上述配制好的裂解液,枪头或旋涡振荡 混合均匀。冰上放置 30min。
(3). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
2. 对于组织样品:
(4). 组织用研钵 (或匀浆器) 研磨充分至细小颗粒。
(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充 分可以适当增加裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用 量),冰上放置 30min。
(6). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒(ZS-PR25001)测定蛋白浓度。