WB超能高效RIPA裂解缓冲液ZS-PR21001

WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液 ZS-PR21001

Superbrilliant® WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液
Superbrilliant® WB High quality Super RIPA lysis buffer

Cat. No.: ZS-PR21001

分:

常温保存,可保存 2 年。

 

根据试验情况推荐选择组合

蛋白酶及磷酸酶抑制剂组分及抑制性能

 

简介:WB 超能高 RIPA 裂解缓冲液主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可 性蛋白,是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳 物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。本产品可以用于 物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay 。提取的蛋白可用于 SDS-PAGE Western Blot ELISA、酶活性分析等后续实验。

 

用途:用于 Western Blot  杂交的蛋样品提取,可高效提取细胞膜、胞浆、细 胞核蛋白。能用于 Co-IP/IP 试验。

 

 Western Blot  杂交蛋白样品

1. 于培养细胞样品 (0.5~10× 106) :

(1). A: 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中, 入蛋白酶抑制剂混合物 A (ZS-PR22005),使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液,加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A,混合均匀,待用。  B: 磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中, 蛋白酶抑制剂混合物 A  、磷酸酶抑制剂混合物 B  、磷酸酶抑制剂混合物 C        (ZS-PR22006) 2.5 μl,使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液, 加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A2.5 μl 磷酸酶抑制剂混合物 B  2.5 μl 磷酸 抑制剂混合物 C,混合均匀,待用。

 

意:加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 WB Super RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2 ,性能不会有下降;加入 Benzonase 核酸酶 (ZS-PR23001) 至终 浓度为 0.25 U/μl,可有效降低样品粘度提高蛋白提取效率。

(2).  离心收集胞,弃上清。加入 250 μl上述配制好的裂解液,枪头或旋涡振荡 合均匀。冰上放置 30min

(3). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。

 

2. 对于组织样品:

(4).  组织用研钵 (或匀浆器) 研磨充分至细小颗粒。

(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。  (如果裂解不充 分可以适当增加裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的 ),冰上放置 30min

(6). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。

(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒(ZS-PR25001)测定蛋白浓度。

 

Fig1. MDA-MB231 细胞 6× 105 细胞/管,每管加入 100 ul 裂解液,冰上孵育 15 min 收集上清获取蛋白。20 mg 乳腺癌组织加 400 ul RIPA,超声破碎获取蛋白。  100°C 10 分钟使之变形,ECL 显影。

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