Z5 热启动超保真 PCR 预混液 (5×,with Dye) ZS-M12003
Superbrilliant® Z5 HotStart HiFi PCR Master Mix (5×,with Dye)
Cat.No.: ZS-M12003
组分：
储存：长期储存置于-20°C 以下，可保存 3 年；短期使用置于 4°C (12 个月)保存。
简介：对于测序、SNP 检测、蛋白表达和基因功能研究等应用而言，高保真扩 增是很关键的。Z5 超保真 DNA 聚合酶来源于高保真 Pfu DNA 聚合酶，具有很 强的 3’-5’校正活性，因此在 PCR 扩增过程中出错的几率极大降低。经基因工程 改造后，使具有 100 倍于 Taq DNA 聚合酶的保真能力，除此外其还具有 6 kb/min 的延伸速度。扩增能力强，扩增速度快，具有高保真性，高特异性。可用于载体构建、突变修复、基因合成、DNA 测序等高保真要求较高的试验。该酶的扩增产物为平端产物，不含“A”尾，可直接克隆于 Superbrilliant® ZERO-Blunt 零背景平末端克隆载体 (ZS-M16002) ，如需进行 T/A 克隆，需在 PCR 产物末端添加 “A”后进行克隆。本产品中的 DNA 聚合酶具有热启动功能，可有效的控制低温 情况下的非特异扩增和酶活损耗，进而保证了 PCR 扩增的特异性和稳定性。预 混液可对多种模板进行超强扩增，以λ DNA 为模板可轻松扩增 15kb 基因片段，以人基因组为模板可轻松扩增 8kb 的基因片段。
5 × HotStart HiFi Z5 PCR Mix 是经优化的即用型 PCR 预混物，含有经抗体封闭 的热启动 Z5 超保真 DNA 聚合酶、dNTPs 、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂 和稳定剂，使用时只需加入模板、引物和灭菌水即可进行 PCR 扩增，大大简化 了操作过程、 减少 PCR 扩增操作时间、提高了效率、避免因多步操作带来的污 染、减少了 PCR 操作过程中的人为误差。具有快速简便、重复性高、特异性好、 灵敏度高和稳定性好的特点。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR 扩增完毕后
可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入 DNA Loading Buffer，如用于克隆时，需 纯化去掉染料。本产品中还整合了 PCR 增强剂组分，可以提高Superbrilliant® Z5 热启动超保真 PCR 预混液对 PCR 反应抑制剂的耐受能力和对不同GC 含量模板的适应能力， 因此可以在扩增高级结构复杂的产物和 PCR 抑制剂含量较高的PCR 体系时使用。
使用方法:
1. 室温融解 5XHotStart HiFi Z5 PCR Mix (with Dye)。
2. 按下表配制反应体系并混合均匀：
*模板 DNA 用量参数 (50μl 反应体系)
3. PCR 扩增循环参数
(1) 在以质粒为模板的情况下，可按照 5 kb/min 设置延伸时间，在以基因组 DNA 和 cDNA 为模板条件下，可按照 2 kb/min 设置延伸时间。
(2) 以 Z5 PCR Mix 进行 PCR 反应时引物长度通常在 18~23bp 为宜，GC 含量 40~60%为最佳。GC 含量超过 65% 以上的模板建议使用 5XQ Solution(Cat No.ZS-M-1058) 。
(3) 由于 Z5 DNA 聚合酶具有较强的引物模板结合能力，通常情况下 TM 值较 Taq DNA 聚合酶高 3~5°C 。因此，退火温度可提高 3~5°C。
4. 向 50μl 体系 PCR 产物中加入 1μl 0.5M 的 EDTA。
注：10mM EDTA 可以抑制 3’-5’外切酶活性，防止 PCR 产物被降解。 5.琼脂糖凝胶电泳：直接取 5μl 扩增产物进行电泳检测。
Fig 1. 以 ITCH 质粒 (500bp，1000bp，2000bp) 和λ基因组 DNA (5000bp) 为 模板，应用 Superbrilliant® Z5 HotStart HiFi PCR Master Mix 和 Superbrilliant® Z6 HotStart HiFi PCR Master Mix，分别扩增 500bp，1000bp，2000bp、5000bp 的片段，每个片段 3 个复孔，1%琼脂糖电泳，M 为 DL2000 Marker。
