化学发光液（ECL）
| 货号 | 规格 |
| NS04021 | 50mL*2/份 |
| NS04022 | 250mL*2/份 |
试剂盒组成
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试剂盒组成 |
保存 |
规格 |
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Super Plus ECL A |
2-8℃ |
50mL |
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Super Plus ECL B |
2-8℃ |
50mL |
存储事项
2-8° C，Super ECL A 要求避光保存。
产品介绍
ECL 化学发光底物用于 Western、Northern 和 Southern blot 分子杂交的化学发光 检测，比传统化学显色法灵敏度高，可达 pg 水平。该产品基于新一代增强型化学发光底 物研制而成，采用新型发光底物（Luminol） ，用于检测辣根过氧化物酶 HRP 标记的抗 体及其关联的抗原， 其与二抗上偶联的辣根过氧化物酶反应时产生发光信号强烈持久， 在暗室中对 X- 光片感光或者用化学发光成像仪进行检测，可用于检测固定在膜上的蛋 白质等生物大分子，可以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。发光液 A 主要成分为 Luminol 及特制发光增强剂，发光液 B 主要成分 H2O2 及特殊稳定剂。发光液 A 与 B 在 辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过 氧化物不稳定随机分解， 形成一种能发光的电子激发中间体， 当后者由激发态返回至基态， 就会产生荧光。增强型 ECL 显色液具有灵敏度高，持续时间长等特点。
使用方法（以 Western 为例）
1． 按每平方厘米膜面积用 0.1-0.2 mL 配置显色液：根据显色液的需要量，取等体 积 A 液和 B 液，混匀后避光保存备用；该显色液必须现配现用。
2. 取出膜， 平放在干净的保鲜膜上， 膜的正面（蛋白质面） 朝上， 在膜的中央加适量 的配置好的显色液（6×8 cm 的膜加 2 mL 显色液），溶液向四周迅速扩散， 覆盖所有膜面。 室温保温 5 分钟左右，在此过程中请仔细观察信号的出现。注意：如果信号强，在暗室 中能很快看到阳性信号出现。
3. 待信号出现且稳定后， 用镊子夹起膜， 除去多余的显色液， 平放在干净的保鲜膜上， 膜的正面（蛋白质面）朝上，在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜，除去保鲜膜与转移膜之 间的空气泡，请务必保证保鲜膜是干净的，不被其他杂物或液体污染。
4. 在暗室中，将膜的正面对着 X- 光片，放入暗盒。第一次曝光时间在 1 分钟左右 ( 有经验的操作者可以根据信号的强弱自行决定 )，立即按要求对 X- 光片进行显影和定影， 确定最佳曝光时间。曝光时间从数秒到数小时不等；特别弱的过夜也可。
注意事项
1.PVDF 膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋白，因此呈现较强的信号。选高质量的 PVDF 膜；尽可能不用 Nylon 膜。
2. 与抗体结合以后，要保证膜处于湿润状态，否则会导致背景较高。
3. 没有信号的原因：有些抗体不识别变性抗原，有时需要考虑电泳过程对蛋白质结构 的影响；样品中无待测蛋白质或含量过低；一抗效价低， 用量少， 可适当增加一抗的用量；
4. 背景过高原因：转移膜封闭不充分；与抗体孵育后洗涤不彻底；膜在处理过程中过干； 二抗用量过多等。
5. 注意及时更换显影液、定影液。
6.A 液和 B 液在吸取过程中必须要更换枪头，A 液和 B 液相互污染后会导致 A 液或 B 液逐渐失效，影响后续的使用效果。
7. 开始反应后的 30 分钟内萤光更强一些，随后萤光会逐渐减弱，因此请注意充分利 用这萤光较强的 30 分钟进行压片。
适用范围
在 Western 印迹分析，核酸杂交以及 EMSA 实验中，HRP 标记的二抗或探针与靶 分子结合再与底物反应产生可见光。
Fig 1. Western blot 检测 HL-1 细胞、大鼠肾组织裂解的 β-actin 蛋白，应用 ECL 发光液分别显色， 一抗为 β-actin 鼠单抗 1：1000 稀释。
仅用于科学研究，不得用于医学诊断
说明书：
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