Taqman 探针法qPCR预混液(2×)
货号 | 规格 |
NL03021 | 1mL/管 |
NL03022 | 100mL/瓶 |
试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 |
保存 |
规格 |
2× Taqman qPCR MIX |
-20℃ |
1mL/ 管 |
储存事项
(1) 长期保存,请避光置于 -20℃可保存 3 年,或 -80℃长期保存。
(2) 经常使用,融化后可置于 4℃,可保存 1 年。
产品介绍
本产品是采用探针法进行 Real-Time PCR 的专用试剂,其中 2×Taqman qPCR MIX 是将化 学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混的 2× 浓度的单组分预混试剂。 进行实验时,PCR 反应液的配制十分方便简单,只需加入引物、探针、模板、水即可。该制品不含有ROX 校正染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量 PCR 机型。
产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶, 同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力,其对乙 醇、胍盐、肝素、血清、植物多酚等具有极高的耐受性, 因此适用于粗制核酸样本的直接 PCR 扩增反 应,对于含有前述杂质的动植物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液粗样本可直接进 行 PCR 检测,省去了核酸提取步骤。该酶经化学修饰,采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100% 无活性,因此可在室温建立反应体系,只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力,从而启 动 PCR 扩增,提高 PCR 扩增的特异性。能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚 体引起的非特异性扩增。随着热循环的不断进行,剩余的酶活会源源不断地释放出来,这就使得此酶 克服了常规 Taq 酶容易出现平台期的弊端,其扩增效率大大提高,提高特异性 PCR 产物的产量、准确性和精确性。该酶具有 5’-3’外切酶活性,适用于作 TaqMan 探针的定量 PCR。
2× Probe Direct DNA 聚合酶对抑制物耐受性:
SDS |
0.01% |
Serum |
Serum 2% |
EtOH |
5% |
Plasma Citrate |
2% |
Heparin |
0.1IU/mL |
Gua SCN |
0.25% |
Hematin |
30uM |
Trizo |
0.5% |
1. 按照如下组分配制 20 μL PCR 反应体系:
终浓度
2× Taqman qPCR MIX |
10 μL |
1× |
PCR Forward Primer (10 μM) |
0.4 μL |
0.2 μM |
PCR Reverse Primer (10 μM) |
0.4 μL |
0.2 μM |
Probe (10 μM) |
0.8 μL |
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DNA 模板 |
0.5~2 μL |
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ddH2O |
Up to 20 μL |
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2. 进行 Real-Time PCR 反应, 通常采用两步法,程序如下:
Stage 1: 95℃ 5 min*
Stage 2: 95℃ 5s
60℃ 30s 40 cycles
注意:该聚合酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶,必须于 95 度加热 5min 以恢 复酶的活性,该热启动步骤不能缩短。
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲线。
- mL