探针法全部

Taqman 探针法qPCR预混液(2×)

货号 规格
NL03021 1mL/管
NL03022 100mL/瓶

 

 

试剂盒组成、储存、稳定性

 

试剂盒组成

保存

规格

2× Taqman qPCR MIX

-20℃

1mL/ 管

 

储存事项

(1) 长期保存,请避光置于 -20℃可保存 3 年,或 -80℃长期保存。

(2) 经常使用,融化后可置于 4℃,可保存 1 年。

产品介绍

本产品是采用探针法进行 Real-Time PCR 的专用试剂,其中Taqman qPCR MIX  是将化  学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反 Buffer、dNTP 染料等试剂预混的 2× 浓度的单组分预混试剂。 进行实验时,PCR 反应液的配制十分方便简单,只需加入引物、探针、模板、水即可。该制品不含有ROX 校正染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量 PCR 机型。

产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶, 同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力,其对乙 醇、胍盐、肝素、血清、植物多酚等具有极高的耐受性,  因此适用于粗制核酸样本的直接 PCR 扩增反 应,对于含有前述杂质的动植物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液粗样本可直接进  PCR 检测,省去了核酸提取步骤。该酶经化学修饰,采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100% 无活性,因此可在室温建立反应体系,只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力,从而启  PCR 扩增,提高 PCR 扩增的特异性。能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚 体引起的非特异性扩增。随着热循环的不断进行,剩余的酶活会源源不断地释放出来,这就使得此酶 克服了常规 Taq 酶容易出现平台期的弊端,其扩增效率大大提高,提高特异性 PCR 产物的产量、准确性和精确性。该酶具有 5’-3’外切酶活性,适用于作 TaqMan 探针的定量 PCR

2× Probe Direct DNA 聚合酶对抑制物耐受性:

 

SDS

0.01%

Serum

Serum 2%

EtOH

5%

Plasma Citrate

2%

Heparin

0.1IU/mL

Gua SCN

0.25%

Hematin

30uM

Trizo

0.5%

 

 

1. 按照如下组分配制 20 μL PCR 反应体系:

 

 终浓度

 

2× Taqman qPCR MIX

10 μL

PCR Forward Primer (10  μM)

0.4 μL

0.2 μM

PCR Reverse Primer (10  μM)

0.4 μL

0.2 μM

Probe (10  μM)

0.8 μL

 

DNA 模板

0.5~2 μL

 

ddH2O

Up to 20 μL

 

 

 

2. 进行 Real-Time PCR 反应, 通常采用两步法,程序如下:

Stage 1:  95℃          5 min*

Stage 2:  95℃          5s

               60℃          30s        40 cycles

注意:该聚合酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶,必须于 95 度加热 5min 以恢 复酶的活性,该热启动步骤不能缩短。

 

3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲线。

 

 
说明书:
 
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