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QuantumTech RT Kit (+gDNA Eraser) 反转录试剂盒

QuantumTech RT Kit (+gDNA Eraser) 反转录试剂盒
货号 次数
NN01012 100次
NN01011 50次

 

适用范围

第一链 cDNA 合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

试剂盒组成、储存、稳定性

 

试剂盒组成

保存

50 

(NN01011)

100 次

(NN01012)

4×gDNA Eraser Mix

-20℃

200 μL

400 μL

5×TRUE RT MasterMix II

-20℃

200 μL

400 μL

No RTase Control Mix*

-20℃

20 μL

40 μL

RNase free H2O

-20℃

1 mL

1 mL

注:No RTase Control Mix*        酶,       TRUE RT MasterMix II 完全一致,可以用于反转录的阴性对照。

储存事项

-20℃ 保存,有效期 24 个月

产品介绍

本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组 DNA 污染的反转录系统。试剂盒采 用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶 , 大幅度提高了稳定性和反转录效率。本试剂盒为 一管式反转录预混 MixTRUE RT MasterMix II 中含有反转录第一链合所需的所有试剂 TRUEscript Hˉ RTaseRNase InhibitorRandom primersOligo dT PrimerdNTP MixtureBuffer)。   通常 Real Time RT-PCR 等实验需要先用 DNase I 消化去除 RNA 中残 留的基因组 DNA(gDNA) , 但是传统 DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂 盒中使用了具有 DNA 分解活性的特殊 gDNA Eraser Mix 2 分钟消除 gDNA 残留, 不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。

产品特点

·新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。

·采用 gDNA Eraser 仅需 2 分钟清除 DNA 残留,不需要 DNase 消化和后续繁琐步骤。

·全预混的反转录 Mix,只需加入 RNA 和水,15 分钟简单快速完成反转录。

· 同时 2 种 Mix  -20℃不易冻结,减少了化冻和混匀时间,使用更简单。

·本产品针对 qPCR 进行特别优化 oligo dT  N6 随机引物配比,使 cDNA 合成可从 RNA 转录 的各个区域起始并具有相同的反转录效率,最大程度保证了 qPCR 结果的真实性和可重复 性。

注意事项

》   避免 RNase 污染。

  保证反转录成功建议使用高质量的 RNA 样品。

 gDNA Eraser Mix TRUE RT MasterMix II 非常粘稠, 溶液容易吸附在管壁和 吸头外导致损失,用前请点甩离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。gDNA Eraser Mix TRUE RT MasterMix II 内包含的酶均为过量,即使每次按照 3.6  μL-3.8  μL 使用,也 不影响使用效果。

  可以不经过基因组去除步骤,直接用TRUE RT MasterMix II 进行反转录。

操作步骤(以 20 μL 反应体系为例,也可以采用 10μL 反应体系 )

1.    RNA TRUE RT MasterMix II     冻;gDNA Eraser Mix  RNase free H2O 在室温(15-25℃)解冻,解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者 轻微涡旋振荡混匀,可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。

2. 在 RNAse free 管里面加入以下成分:( 建议使用 PCR 管冰上配制 )

Components

Volume

Total RNA/mRNA

 12 μL *

4×gDNA Eraser Mix

4 μL ( 见注意事项 3)

RNase free H2O

to 16 μL(补足到总体积 16  μL)

*Total RNA 建议不超过 2 μg,mRNA 不超过 200 ng (20μL 体系)。

3. 移液器轻轻吹打混匀,42℃孵育 2 分钟(或者 37℃孵育 5 分钟) 。控温步骤均建议 PCR 仪器上进行。

4. 继续直接在同一管加入如下成份:

Components

Volume

5×TRUE RT MasterMix II

4 μL ( 见注意事项 3)

5. 移液器轻轻吹打混匀(总体积 20 μL)

如使用 mRNA 模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有 Poly(A) 尾结构,42℃孵育 15- 20min。

如使用 mRNA 模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含 Poly(A) 尾结构,25℃孵育 10 min 42℃孵育 15-20min

注意: 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域,可尝试将反应温度提高至 50℃,有助于提高产量。

6. 85℃加热 5 min 失活 TRUEscript H-  RTase  gDNA Eraser

7. 得到的 cDNA 产物可立即用于 qPCR 反应,或在 -20℃保存,并在半年内使用;长期存 放建议分装后在 -70℃保存。cDNA 应避免反复冻融。

RT-qPCR

取适量反转录 cDNA 产物(一般不超过 qPCR 反应体积的 1/10)作为 qPCR 模板,按照厂 家荧光定量 PCR 试剂说明书进行下一步荧光定量 PCR 如果表达基因含量丰富,可以根据实 际适当稀释 cDNA 模板使用。

 
说明书:
 
 
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