Complex Plant RNA Kit 多糖多酚/复杂植物RNA快速提取试剂盒

货号	次数
NP08011	50次

适用范围

适用于快速提取植物组织细胞总 RNA，使用独有基因组 DNA 清除柱技术可有效清除电泳可见 gDNA 残留，RNA 可用于反转录 PCR，荧光定量 PCR 等。

试剂盒组成、储存、稳定性

试剂盒组成	保存	50 次
裂解液 CLB	室温	50 mL
裂解液 RLT Plus	室温	25 mL
去蛋白液 RW1	室温	40 mL
漂洗液 RW	室温	10 mL 第一次使用前用无水乙醇稀释至 50mL
RNase-free H2O	室温	10 mL
基因组 DNANE 清除柱和收集管	室温	50 套
RNase-free 吸附柱 RNANE 和收集管	室温	50 套

本试剂盒在室温储存 24 个月不影响使用效果。

储存事项

不合适的储存于低温（4℃或者－ 20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃- 25℃)进行。

避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍

该试剂盒基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，离心沉淀去除多糖多酚和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节 RNA 结合吸附到基因组 DNA 清除柱，然后 RNA 被选择性洗脱滤过，吸附在基因组 DNA 清除柱上的残留 DNA 无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉 DNA。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后， RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H20 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点

·完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

·简捷，单个样品操作一般可在 25 分钟内完成。

·独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。

·世界领先适应性极其广泛，可以提取包括复杂中草药如石斛 / 丹参 / 雪莲 / 人参、复杂淀粉种子如水稻 / 小麦 / 玉米种子、复杂果实如葡萄 / 蓝莓 / 草莓 / 西瓜果实、复杂抗逆植物如冬青 / 松针 / 沙棘 / 胡杨、复杂花卉月季 / 玫瑰 / 梅 / 牡丹花、复杂多糖植物紫菜 / 仙人掌 / 芦荟 / 百合鳞茎 / 水稻种子等数百种国内外试剂盒提取失败的样品。

· 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 2.1~2.2，基本无 DNA 残留 , 可用于 RT-PCR，Northern-blot，二代测序和各种实验。

注意事项

》所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机，如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

》需要自备 β- 巯基乙醇，乙醇，研钵 ( 可选 )。

》样品处理量绝对不要超过基因组清除柱 DNANE 和和 RNA 吸附柱 RNANE 处理能力，否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

》裂解液 CLB 和 RLT Plus 和去蛋白液 RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

》关于 DNA 的微量残留 :

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100% 无残留），该 RNA 提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1) 选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理。

4) 在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RNANE 上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒 ( 货号：NP09011) 前可先索取具体操作说明书。

操作步骤（实验前请先阅读注意事项）

提示：第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇 !

取 1mL 裂解液 CLB 至离心管内 ( 如果 CLB 有析出或者沉淀需先置于 65℃水浴重新溶解），在裂解液 CLB 中加入 5% β- 巯基乙醇（1mL CLB 加 50μL β- 巯基乙醇）。颠倒混匀后 65℃水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。

1. 直接研磨法（实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法）:

a. 新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取 100mg-200mg（水分少的样品如叶片种子等可加 100mg-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）迅速剪成小块放入研钵，加入 1mL CLB（已加有 β- 巯基乙醇）室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液 CLB 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。

β- 巯基乙醇是裂解液 CLB 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到 10-20%。如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入 PVP40 至终浓度 2%。

b. 将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡 15 秒，短时放回 65℃水浴中（5-10 min），中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。13，000rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。

c. 取裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇 (0.5 体积 )，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。

d. 立刻接操作步骤的步骤 3。

2. 液氮研磨法（适用广泛，提取复杂难破碎，易降解样品时推荐此法）:

a. 液氮中研磨新鲜或 -70℃冷冻的材料至细粉。

b. 转移 100mg-200mg 细粉（水分少的样品如叶片种子等可加 100mg-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）加至预热的裂解液 CLB（已加有 β- 巯基乙醇）离心管中。立即剧烈涡旋 30-60 秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果 ( 或者电动匀浆 30 秒 )，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。

c. 短时放回 65℃水浴中（5-10 min），中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。 d. 将裂解物 13,000 rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。

e. 取裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇 (0.5 体积 )，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。

f. 立刻接操作步骤的步骤 3。

3. 将混合物 ( 每次小于 720μL，多可以分两次加入 ) 加入一个基因组清除柱中，（清除柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废液。

确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

4. 将基因组 DNA 清除柱子放在一个干净 2mL 离心管内（不用 RNAse free 或者 DEPC 处理，一般干净的新离心管即可。也可使用 RNA 吸附柱配套的新的干净收集管），在基因组清除柱内加 500μL 裂解液 RLT Plus，13,000 rpm 离心 30 秒，收集滤液（RNA 在滤液中），用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为 450-500μL 左右，滤过时候损失体积应该减去），加入 0.5 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。