细胞周期染色分析试剂盒 ZS-C31003
Superbrilliant® 细胞周期染色分析试剂盒
Superbrilliant® Cell Cycle Detection Kit
Cat.No.: ZS-C31003
Superbrilliant® Cell Cycle Detection Kit
Cat.No.: ZS-C31003
组分:
储存：
（1）首次使用前将 Rnase A 全部加到 PI Staining Buffer 中混合均匀 2～8℃可保存 6 个月。
（2） 2～8℃，有效期 2 年。
简介：细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，由细胞周期素(Cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)所推动。XDK 周期性积累与分解对细胞周期进展起着正调控作用,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)通过在细胞周期适当的时间点上抑制 CDK的活性,从而对细胞周期进展起负调控作用。细胞周期又可以分为间期（interphase）和有丝分裂期(M phase)，细胞间期又常划分为休眠期（G0），DNA 合成前期（G1），DNA 合成期（S），DNA 合成后期（G2），整个周期可表示为 G1→S→G2→M。
DNA 周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。
采用经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析，利用细胞内 DNA 能够和荧光染料（如碘化丙啶--PI）结合的特性，细胞各个时期其 DNA 含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样（如下图所示）。碘化丙啶染色后，假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1，那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2，正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1-2 之间。凋亡细胞由于
细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA 片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于 1，在流式检测的荧光图上出现所谓的 sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。PI-DNA 复合物的最大激发波长为 535nm，最大发射波长为 615nm，PI 的红色荧光在 FL2 或 FL3 通道检测（通常检测通道为：488nm 激发；583nm 检测）。每个样采集 20000～30000events。本试剂盒经过优化的配方，可获得绝佳的周期结果，可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的 DNA 含量（细胞周期）检测。
注意：自备 75％乙醇
操作步骤
1. 细胞周期检测需要细胞量大，通常使用 6 孔板以上的培养器皿进行检测（视细胞密度，约 1×10 6 个 cells）。
贴壁细胞：从培养板中将培养基吸除，PBS 溶液清洗 3 次，加入 200 μl 胰酶消化至单细胞悬液（可轻轻吹打），加入 1 ml PBS 终止消化，吹打细胞成单细胞悬液。悬浮细胞：可直接离心进行后续操作。
2. 2000 rpm（300g），离心 10 min，弃上清（采用吸取方式，防止细胞丢失）。
3. 加入 1 ml PBS，轻轻吹打使细胞悬浮，2000 rpm（300g），离心 10 min，弃上清（采用吸取方式，防止细胞丢失）。
4. 加入 500 μl PBS 重悬细胞，吹打细胞至单细胞悬液。将细胞逐滴加入到 10 ml冰冷 75％乙醇中（事先冻存于-20℃），旋涡混合仪上迅速混合均匀，4℃固定>2h(通常过夜)，固定的细胞可于-20℃保存 1 个月。
5. 2000 rpm（300g），离心 10 min，完全弃上清（采用吸取方式，防止细胞丢失），用 200 µl 吸头尽可能多的吸除残留乙醇。
6.直接使用 0.5 ml PI Staining Buffer（确认已经加入 Rnase A）重悬细胞，使用PI Staining Buffer 调整细胞浓度至 0.5~1×10 6个/ml。
7.室温避光孵育 15～20 min 后进行检测（细胞孵育时间不要超过 1h）。
8. 使用 FL2 通道检测，收集 20000～30000 events。FL2 使用 Lin 参数收集信号，FL2-W/FL2-A，进行圈门排除粘连体细胞。试验结束后，使用 Flowjo 或 ModFit软件进行拟和数据分析。通常使用该试剂盒可以获得绝佳的结果（CV 极小）。
Fig1.比较 SuperbrilliantTM Cell Cycle Detection Kit 和自配试剂。自配试剂将细胞在 37℃下用 0.025 mg / mL 的碘化丙啶 (PI) 在避光染色 0.5 小时。然后用 BDFACS Calibur 流式细胞仪 (BD，Franklin Lakes, NJ) , Cell Quest 和 MODFIT计算机程序 (BD) 进行分析。
现价：
¥
323.00
原价：
¥358.00
