16 分钟高纯血液基因组 DNA 提取试剂盒 ZS-M11003
Superbrilliant® 16 min High-quality Blood Genomic DNA Extraction Kit
Cat. No.: ZS-M11003
储存:
(1)Protease K(20 mg/ml)长期保存请储存于-20℃ , 短期室温保存(6 个月),其它组分储存于室温避光保存。
(2)该试剂盒的保质期为 2 年。
简介:该试剂盒采用独特的裂解液,在高盐浓度下使 DNA 高效特异的结合到硅 基质离心吸附柱上,并在低浓度盐和微碱条件下释放 DNA。可快速可靠的从抗凝 全血样本中纯化出高纯度的基因组 DNA,最大限度的去除蛋白、色素、脂类等 杂质污染。应用本试剂盒获取的 DNA 纯度高,无抑制剂,DNA 片段大,产量高,稳定可靠。A260/A280 为 1.6-1.9 。应用本试剂盒提取的 DNA 无蛋白、核酸酶污染,可直接用于限制性酶切反应、PCR 、文库构建、Southern 杂交等多种分
子生物学实验。
注意事项:
(1)本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2)Solution B1 储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于 56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。
操作方法:
(1)样本处理(1.5 或 2 ml EP 管中处理)
人抗凝全血:吸取 0.2~0.8 ml 抗凝全血加入到 800 μl Buffer EL 中上下颠倒混合均匀,13000 rpm 离心 30 s ,去上清,留白细胞沉淀,用 50 μl 水重悬白细胞沉淀(有少量红细胞残留并不影响 DNA 的产量,如仍然有大量红细胞未裂解,可再次用 Buffer EL 将红细胞裂解)。
淋巴细胞分离液分离出的白细胞:直接吸取 50~80 μl 白细胞。
有核红细胞抗凝全血(禽血):吸取 10 μl 抗凝全血加入到 50 μl 无菌水中,漩涡震荡混合均匀。
(2)向上述准备好的样品溶液中加入 100 μl Solution B1 和 20 μl Protease K 漩 涡混合均 10s ,56℃水浴锅中消化 5~30 min(长时间消化可提高 DNA 的产量)。
(3)加入 700 μl Solution B2 漩涡震荡混合均匀 1 min,肉眼观察有无未溶解的血凝块,如果无血凝块,则直接倒入到吸附柱中,13000 rpm 离心 1 min。
注意:如果有未溶解的血凝块,则短离心去除血凝块后,再倒入到吸附柱中,进行后续离心操作。(4)倒掉废液,向吸附柱中加入 500 μl Washing Buffer,13000 rpm 离心 15 s。重复此步骤一次。
(5)将吸附柱重新放回离心机,13000 rpm 空离心 2 min,将残留的乙醇彻底甩干。
(6)将吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl EB(EB预热到 65℃将提高洗脱产量),室温放置 1 min,13,000rpm 离心 1 min ,洗脱液即为基因组 DNA ,冷冻保存。
Fig 1.应用 SuperbrilliantTM 16 min High-quality Blood Genomic DNA Extraction Kit、A 公司、T 公司和 Q 公司的血液提取试剂盒分别按其说明书提取人外周血样
品的 DNA,提取血量分别为 250µl 和 500µl。