第三代 ZAPA 植物直扩 PCR 试剂盒 ZS-M12009
Superbrilliant® ZAPA3G Plant Direct PCR Kit
Cat. No.: ZS-M12009
组分：
储存：长期储存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C，可保存 3 个月
。
简介：ZAPA3G DNA 聚合酶是一种新型的酶体系，经基因工程改造和电子重构架，增加了 DNA 的亲和力，与其他高保真酶相比具有行业领先性。ZAPA3G DNA聚合酶具有 6kb/min 以上的扩增速度p 具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得 ZAPA 三代系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50C以下 100%无活性，因此可在室温建立反应体系。热启动配方中，酶是结合在一个特定载体上，使其在第一部变性之前一直保持灭活状态，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力，从而启动 PCR 扩增，这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加，提高 PCR 扩增的特异性、PCR产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。当执行高保真 PCR 时，在产生足够的产物用于克隆的前提下，减少循环数是很重要的。额外的循环数增加了产量却降低了保真性：反应早期少量的错配都是固定的，此后在每个连续循环中都得到放大，在随后的周期，任何额外的错误都将导致突变扩增的比例增加。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切酶活性、3’-5’的外切酶活性，产物部分带有”A“尾巴，部分为平末端，因此产物可用于 TA 克隆或平端克隆。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入 DNA Loading Buffer。
特点和用途：
(1) 高杂质耐受性：该酶可耐受植物中的多糖多酚；可直接使用叶片等材料进 行 PCR 扩增，无需基因组提取。
(2) 粗制样本的扩增能力：扩增能力>1.7kb。
(3) 快速 PCR：该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，可显著的缩短 PCR 的扩 增时间，在常规测试条件下，10s 的延伸时间可完成 1kb 的基因组 DNA 扩增。
(4) 高 PCR 成功率：与其它类型的 PCR 扩增试剂对比中，ZAPA3G Universal PCR Mix 表现出最佳的 PCR 扩增成功率。
(5) 高保真性能：该制品包含一定比例的 ZAPA High Fidelity 超保真 DNA 聚 合酶，因此其具有一定的保真性能 (挑菌落测试，其保真性能约为 Taq DNA 聚 合酶的 60 倍) 。
(6) 热启动，防止非特异性扩增：ZAPA3G Universal PCR Mix 产品采用专有 的热启动技术，确保 50 度以下完全无活性，仅有 95 度加热 5min 以后才能 恢复其活性，因此可最大限度的提高扩增的特异性，减少非特异性产物的产生。
(7) 高效的快速 DNA 释放剂：尽管该 PCR Mix 可以直接 使用叶片进行扩 增，但我们仍然推荐采用 DNA 释放剂进行 样本的快速前处理 (约需要 5min， 可高通量操作) 。DNA 释 放剂的前处理，使得制备的 DNA 模板可以进行多次、 多基 因扩增，并长期保存植物 DNA，经 DNA 释放剂处理的样本，在室温条件 下放置 1 个月，无任何后续影响，-20 可长期保存。
使用方法：
1. DNA 释放
(1) 采用加热法：取 2-3mm 直径叶片 (白 Tip 头上沿大小) 、 1-10mg 果实 等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 释放剂 A，于 PCR 仪中 98°C 加热 5min，加热完毕后加入 50 μl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
(2) 采用钢珠研磨法：取 2-3mm 直径叶片、1-10mg 果实等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 释放剂 A 和 2-3 粒钢珠，研磨 1-2min 成 浆体装。研磨完毕后加入 250 μl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反应体系并混合均匀：
3. PCR 扩增循环参数
请注意：该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩短，否则 DNA 聚合酶无
法恢复活性。
4. 电泳：1% 琼脂糖凝胶电泳，上样 5 μl，电泳结束在紫外灯下检测条带。
5. 注意事项：(1) 当模板 GC 含量>70%时，请添加 SupersmartTM 5 ×高 GC 含 量模板、长片段辅助 buffer (Cat. No.: ZS-M12012) 。(2) 当扩增片段<1kb 时， 延伸时间可直接使用 15s；扩增片段 1-2kb 时,延伸时间使用 45s ；扩增片段 2-3kb 时,延伸时间使用 1min；当扩增片段>3kb 时，请按照 2kb/min 的延伸时 间进行设置。(3) 尽管该酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照2kb/min 设置延 伸时 间的条件下，能获得最高的产量 (4) 当采用全血、血浆等 蛋白含量极高的 样本时，扩增完毕后可能会有变性的蛋白沉淀，请离心后再进行点样和电泳。
- 规格10
