第三代ZAPA植物直扩PCR试剂盒ZS-M12009

第三代 ZAPA 植物直扩 PCR 试剂盒 ZS-M12009

Superbrilliant®   第三代 ZAPA 植物直扩 PCR 试剂盒
Superbrilliant® ZAPA3G Plant Direct PCR Kit

Cat. No.: ZS-M12009

分:

储存:长期储存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 C,可保存 3 个月

 

简介:ZAPA3G DNA  聚合酶是一种新型的酶体系,经基因工程改造和电子重构架,增加了 DNA 的亲和力,与其他高保真酶相比具有行业领先性。ZAPA3G DNA聚合酶具有 6kb/min 以上的扩增速度p 具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩成功率、高产量,这些特点使得 ZAPA 三代系列产品可用于粗制样品的直接扩增,无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰,采用专有的热启动技术确保 50C以下 100%无活性,因此可在室温建立反应体系。热启动配方中,酶是结合在一个特定载体上,使其在第一部变性之前一直保持灭活状态,只有 95 度条件下加 5min 后才能完全恢复酶的活力,从而启动 PCR 扩增,这样就消除了反应设启动过程中非特异性启动导致的产物增加,提高 PCR 扩增的特异性、PCR产物的产量、  准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。当执行高保真 PCR 时,在产生足够的产物用于克隆的前提下,减少循环数是很重要的。额外的循环数增加了产量却降低了保真性:反应早期少量的错配都是固定的,此后每个连续循环中都得到放大,在随后的周期,任何额外的错误都将导致突变扩增的比例增加。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切酶活性、3’-5’的外切酶活性,产物部分带有A“尾巴,部分为平末端,因此产物可用于 TA 隆或平端克隆。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶,无需再加入 DNA Loading Buffer

 

特点和用途:

(1) 高杂质耐受性:该酶可耐受植物中的多糖多酚;可直接使用叶片等材料  PCR 扩增,无需基因组提取。

(2) 粗制样本的扩增能力:扩增能力>1.7kb

(3) 快速 PCR:该具有 6kb/min  以上的扩增速度,可显著的缩短 PCR 的扩 增时间,在常规测试条件下,10s  的延伸时间可完成 1kb  的基因组 DNA 扩增。

(4) 高 PCR 成功率:与其它类型的 PCR 扩增试剂对比中,ZAPA3G Universal PCR Mix 表现出最佳的 PCR 扩增成功率。

(5) 高保真性能:该制品包含一定比例的 ZAPA High Fidelity 超保真 DNA   合酶,因此其具有一定的保真 (挑菌落测试,其保真性能约为 Taq DNA   合酶的 60 )

(6) 热启动,防止非特异性扩增:ZAPA3G Universal PCR Mix 产品采用专有 启动技术,确保 50 度以下完全无活性,仅有 95 度加热 5min  以后才能 恢复其活性,因此可最大限度的提高扩增的特异性,减少非特异性产物的产生。

(7)  高效的快速 DNA 释放剂:尽管该 PCR Mix  可以直接 使用叶片进行 增,但我们仍然推荐采用 DNA 释放剂进行 样本的快速前处理 (约需要 5min 可高通量操作) DNA 放剂的前处理,使得制备的 DNA 模板可以进行多次、 多基 因扩增,并长期保存植物 DNA,经 DNA 释放剂处理的样本,在室温条件 下放置 1 个月,无任何后续影响-20 可长期保存。

使用方法:

1. DNA 释放

(1) 采用加热法:取 2-3mm 直径叶片 (白 Tip  头上沿大小) 、  1-10mg  果实 等材料,放入到 0.2ml EP  管中,加入 50 μl  快速 DNA 释放剂 A,于 PCR  98°C 加热 5min,加热完毕后加入 50 μl  快速 DNA 释放剂 B,混合均匀,可使用。

(2) 采用钢珠研磨法:取 2-3mm 直径叶片、1-10mg  果实等材料,放入 2ml EP  管中,加入 250 μl  快速 DNA 释放剂 A  2-3 粒钢珠,研磨 1-2min  浆体装。研磨完毕后加 250 μl  快速 DNA 释放剂 B,混合均匀,即可使用。

2. 按下表配制 PCR 反应体系并混合均匀

3. PCR 扩增循环参数

请注意:该制品为启动制品预变性步骤 5min 不可缩短,否则 DNA  聚合酶无

法恢复活性。

4.  泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μl,电泳结束在紫外灯下检测条带。

5.  注意事项:(1)  当模板 GC 含量>70%时,请添加 SupersmartTM 5 × GC  量模板、长片段辅助 buffer (Cat. No.: ZS-M12012) 。(2)  当扩增片段<1kb  时, 伸时间可直接使用 15s;扩增片段 1-2kb ,延伸时间使用 45s ;扩增片段  2-3kb  ,延伸时间使用 1min;当扩增片段>3kb 时,请按照 2kb/min  的延伸时 间进行设置。(3) 尽管该酶具有 6kb/min  的延伸速度,但按照2kb/min 置延 伸时 间的条下,能获得最高的产量 (4)  当采用全血、血浆等 蛋白含量极高的 样本时,扩增完毕后可能会有变性的蛋白沉淀,请离心后再进行点样和电泳。

 

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