一步法无缝克隆试剂盒
| 货号 | 次数 |
| NC07011 | 100μL |
产品简介
一种简单、快速并且高效的DNA 无缝克隆技术， 可将插入片段定向克隆至任意载体 的任意位点。将载体进行线性化，在插入片段正/反向 PCR 引物5'端引入线性化载体的 末端序列，使得 PCR 产物5'和3'最末端分别带有和线性化载体两末端 一 致的序列(15 -20 bp)。 这种 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下， 30℃或37℃反应30 -40min 即可进行转化，完成定向克隆。
作为新 一代重组克隆试剂盒，独特的非连接酶依赖体系，极大地降低了载体自连背 景， 阳性率可达95%以上。高度优化的反应缓冲液及增强的重组酶， 显著提高克隆的重 组效率与对杂质的耐受度， 使得线性化载体与插入片段不进行纯化直接用于重组克隆成为可能， 极大的简化了实验步骤。
产品特点
. 不受载体和插入片段酶切位点的可用性和载体平端/粘性末端的限制， 可以在任意位点进行克隆。
· 无缝克隆， 插入点不会引入不需要的碱基序列。
· 高效、准确， 阳 性 率 > 9 5 % 。
效果对比
其他公司克隆试剂盒转化效果 核小体一步克隆试剂盒转化效果
实验原理
菌落PCR 鉴定
◇ 挑 取 重 组 反 应 转 化 平 板 上 若 干 个 克 隆 进 行 菌 落PCR 鉴 定 ， 扩 增 引 物 至 少 使 用 一 条 载 体 上的通用测序引物 。 如果克隆正确 ，应有长度略大于插入片段大小的条带出现 。
M 123 45 6 891011121314151617181920212223CK
0.5 k b p—
菌 落 PCR 琼脂糖凝胶电泳检测
M :DL5000 Marker;1-23:23 个阳性克隆 (CK 为 阴 性 对 照 )
◇ 菌 落PCR 鉴 定 为 阳 性 的 菌 落 ， 可 再 将 剩 余 菌 液 接 种 至 含 有 适 当 抗 生 素 的 液 体LB 培养基
中培养过夜 ，提取质粒进行酶切鉴定 ， 或直接进行一代测序。
说明书：
关联技术服务
- mL
