小鼠原代细胞培养
小鼠原代细胞培养的步骤如下：
1. 用无菌眼科小剪刀或刮胡刀片将鼠胚躯干剪（切）成1mm3以下的碎块，吸置于离心管内。
2. 加适量胰酶，将离心管置于培养箱中10～20分钟。
3. 取出离心管，反复吹打，加足量培养液终止消化。
4. 离心1000转，5分钟。
5. 弃掉上清，加适量培养液，反复吹打20次。
6. 分装到T75中，一般每2个胚胎可以制成一个T75的原代细胞。
7. 置37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱培养。
8. 待细胞长3～7天细胞互相重叠爬满整个培养瓶底时即可进行第一次传代。
9. 用吸弃培养液上清。
10. PBS（不含钙镁）冲洗两次。
11. 加0.25％胰酶－0.02 EDT消化。
12. 在显微镜下观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，用移液管吹打冲洗瓶底5～6次。
13. 即刻加MEF培养液终止消化。
14. 1000转，5分钟离心。吸弃上清。
15. 加足培养液，吹打制成单细胞悬液，分装到各T75中完成传代。
16. 原代细胞中还有少量组织块未被充分消化，在以后的每次传代过程中要尽量制成单细胞悬液，组织块会逐渐消失。
17. 原代细胞中混有一些杂细胞，一般传到第3代时，杂细胞逐渐减少。小鼠胚胎成纤维细胞为梭状；但连成片时，细胞互相交联，形态不典型。
