原代神经细胞培养的步骤如下：
1. 从颅骨和硬脑膜中分离出脑组织，显微镜下充分取出脑膜和血管组织。
2. 将脑组织用PBS清洗三次，剪成1mm3大小的组织块，至于含DMEM/F12的离心管中，吸管轻吹打10次，静置离心管1~2min，取细胞悬液。
3. 重复以上步骤2次。
4. 细胞悬液以700r/min离心6min，吸除上清，获得细胞沉淀。用(DMEM/F12+1%N2+2%B27+bFGF20mg/ml+EFG20mg/ml)重悬后，过200目筛网，并计数。
5. 按5×10^5/ml密度接种，置于37℃，5%CO2培养。2天后隔天换液。通常一周左右，神经球长出。
希望以上信息对您有帮助。
