上皮细胞培养
上皮细胞培养主要分为以下步骤:
1 取材:可以取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤也是较好的选择,切成0.5~1平方厘米的小块。
2 EDTA处理:先置入0.02%EDTA中室温置5分钟,之后换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。
3 分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。
4 温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分钟。之后用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。
5 培养液制备:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清液,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,在CO2温箱培养。
