双荧光素酶验证试验

双荧光素酶验证试验是一种常用的实验方法,可以用于多种研究,如miRNA靶基因验证、转录因子调控验证和ceRNA研究等。

 

该方法的原理是将目的基因转录调控原件构建入带有荧光素酶(Firefly luciferase)的表达载体,构建成报告基因质粒,使这段序列调控luciferase的转录表达。再将报告基因质粒转染细胞,给予其不同的处理后裂解细胞,并加入底物荧光素(luciferin),luciferase可催化luciferin发出荧光。检测得到的荧光值高低可以判断不同处理组对该转录调控原件的影响。

 

双荧光素酶验证试验具有检测灵敏度高、动态范围广、应用灵活等优势。另外,为了避免质粒转染细胞时效率差异所造成的误差,通常会同时转入Renilla luciferase的报告基因质粒作为内参,从而构成双荧光素酶报告系统。

 

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