单细胞测序实验流程

单细胞测序实验流程如下:

 

1. 样品预处理。需要从通过酶解或机械过程、细胞分选等细胞分离技术,或是其他细胞分离技术消化的整个样品中生成有活力的单细胞悬浮液。如果需要,也可以用抗体对样品进行染色,以标记细胞表面蛋白和其他生物分析物,或对感兴趣的细胞类型进行FACS富集 。

2. 进行单细胞分离 。将目标细胞从组织中分离出来可以采用以下几种方法:

  a. 微流控技术:通过人为控制微米级通道中的液体流速实现单细胞分离。

  b. 连续稀释法:将细胞悬液进行不同梯度倍数的稀释。

  c. 显微操作法:显微镜下根据观察到的细胞形态和颜色,通过显微操作器分离单细胞。

  d. 荧光激活细胞分离法:基于预先进行荧光标记的细胞表面特异性分子标志和细胞光散射特性,利用流式细胞仪分选单细胞。

  e.激光捕获显微切割法:在显微镜下,选择性的利用激光从固定组织切片中进行显微切割和分离单细胞。

3. 对核苷酸序列进行扩增。可以采用全基因组扩增(WGA)或全转录组扩增(WTA)的方法。全基因组扩增(WGA):PCR;全转录组扩增(WTA):基于PCR的半随机转录组扩增。

 

以上是单细胞测序实验的主要流程,具体情况会因实验的类型、目标以及实验者的具体环境而有所不同,还请您根据实际情况具体分析。

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