北京核小体 助力ATP
SYBR Green qPCR是一种实时定量聚合酶链反应(qPCR)的荧光技术,其中使用了SYBR Green作为荧光染料。SYBR Green可以与扩增产物的双链DNA结合并发出荧光信号,该荧光信号与扩增产物的数量成正比。
在SYBR Green qPCR实验中,首先设计引物,引物是一对与目标序列的两个相互补的寡核苷酸序列。然后,将样品中的DNA或RNA进行逆转录和扩增,生成目标序列的扩增产物。在扩增过程中,SYBR Green染料会结合到双链扩增产物上,并发出荧光信号。
实时定量PCR仪器能够检测到每一个PCR循环的荧光信号,并记录下来。通过监测荧光信号的增加情况,得到一个称为荧光增长曲线的图像。利用荧光增长曲线可以计算出目标序列的起始量,并结合标准曲线或其他方法,可以定量分析样品中目标序列的相对量。
SYBR Green qPCR的优点是比较简单和经济,因为不需要专门设计和合成探针,只需要设计引物即可。然而,由于SYBR Green无法区分非特定携带荧光信号的扩增产物,所以可能存在非特异性信号或没有特异性产物的假阳性结果。因此,在使用SYBR Green qPCR时,需要进行熔解曲线分析来进一步确认扩增产物的特异性。
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