taqman探针原理
TaqMan探针是一种特殊设计的探针，用于在qPCR反应中定量测定目标DNA的浓度。其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和5'-nuclease活性。
TaqMan探针通常由两部分组成：一个在5'端标记的荧光染料（通常为FAM，也可以是其他染料），和一个在3'端含有与目标DNA序列互补的序列的荧光淬灭剂（一般为BHQ1、BHQ2等）。
在PCR扩增过程中，当核酸链缩合酶（Taq DNA聚合酶）进行DNA链合成时，TaqMan探针与目标DNA序列互补结合。在PCR的温度条件下，酶消化探针，使荧光淬灭剂与荧光染料分离，从而释放出荧光信号。
具体的反应过程如下：
1. 引物结合：在PCR反应的引物结合阶段，引物与目标DNA序列的两个末端结合，并形成一个特定的引物-模板复合物。
2. Taq DNA聚合酶扩增：在PCR的DNA合成阶段，Taq DNA聚合酶开始从引物的3'端向5'端移动，合成新的DNA链。当聚合酶到达TaqMan探针所在的位点时，它开始酶解附近的探针。
3. 酶解探针：聚合酶具有5'-nuclease活性，当其酶解探针的DNA链时，荧光染料和荧光淬灭剂之间的共振能量转移被破坏，导致荧光信号被释放出来。
4. 荧光信号检测：PCR仪实时监测每个反应管中的荧光信号强度。信号强度与PCR反应中目标DNA的初始浓度成正比，从而可以通过荧光信号的强弱来定量测定目标DNA的浓度。
利用TaqMan探针的这种原理，可以准确地测定目标DNA的浓度，并且具有高灵敏度和特异性。同时，TaqMan探针还能够在同一反应中同时检测多个目标序列。
