免疫共沉淀琼脂糖珠作用
免疫共沉淀(immunoprecipitation,IP)是一种用于富集靶蛋白并与其相互作用的蛋白质复合物的方法。在这个过程中,琼脂糖珠可以作为固相载体被用于捕获特定的抗体及其结合的蛋白质。
IP的基本步骤如下:
1. 抗体与琼脂糖珠偶联:将特定的抗体与琼脂糖珠偶联,以使抗体紧密结合于珠子表面。
2. 细胞溶解:将需要富集的细胞提取物或组织溶解,并加入适当的缓冲液以稀释样品。
3. 免疫沉淀:将琼脂糖珠偶联的抗体加入溶解的样品中,使其与靶蛋白及其相关的蛋白质复合物结合。
4. 洗涤:通过洗涤步骤去除非特异性结合的蛋白质和杂质。
5. 洗涤液去除:去除洗涤缓冲液以减少干扰物。
6. 提取:将所沉淀的蛋白质与琼脂糖珠分离,可以使用变性剂如SDS,或者改变pH或盐浓度以破坏抗原-抗体结合。
通过IP,可以富集目标抗体与琼脂糖珠结合的靶蛋白或蛋白质复合物。这些富集的样品可以进一步用于Western blot、质谱分析等来检测蛋白质相互作用、翻译后修饰等研究。免疫共沉淀是研究蛋白质相互作用和信号转导途径中的常用实验技术之一。