二代测序文库构建流程

二代测序文库构建流程大致包括以下步骤：

1. 样品提取：从样品中提取DNA，目前常用的DNA提取方法有三种，分别为化学、物理和生物学方法。

2. DNA片段断裂：将长链DNA切成较短的DNA片段，通常长度为400-600 bp。片段断裂可以使用多种方法实现，如化学法、机械法、限制性内切酶切等。

3. 连接适配器：将DNA样品的两端连接适配器，以便于进行高通量测序。连接适配器的方法有多种，如ligase连接、酵母使用技术、导向连接技术等。

4. PCR扩增：将带有适配器的DNA片段扩增到充分的数量，便于下一步文库纯化。选择合适的PCR方法和环境因素对PCR扩增的效率和特异性有着重要的影响。

5. 文库纯化：将PCR扩增的DNA片段独立出来，去除掉含有不必要的杂质。常用的纯化方法包括：酚/氯仿、硅胶柱、磁珠法、凝胶切割和流式细胞仪分离等。

6. 文库鉴定：检测文库的重复度、插入文库的DNA片段大小和插入浓度等因素。文库鉴定的方法有多种，如聚合酶链反应（PCR）、UV分光光度计、凝胶电泳和实时荧光定量PCR等。

7. 二代测序：最后一步是将文库进行高通量测序，得到序列数据。

需要注意的是，在进行文库构建时，应该注意样品的安全性，保留足够的原材料以便后续检查和验证；在每一个步骤中都应该注意和控制样品中的质量和量，避免出现异常；此外，如果出现问题需要及时识别并调整实验措施，保质保量完成文库构建流程。